米薇
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王晶
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应万涛
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贾伟
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蔡耘
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钱小红
色谱
多维色谱分离、串联质谱分析技术已在蛋白质组研究中得到广泛应用.然而生物样品的蛋白质以及全酶切肽段具有高度的复杂性,这严重干扰了蛋白质高通量、规模化的分析.通过标签肽段富集进行样品预分离可以降低体系的复杂程度.本文建立了一种基于共价色谱技术选择性分离富集含半胱氨酸肽的方法,从而降低了样品体系的复杂程度.首先以牛血清白蛋白(BSA)的酶切肽段为模型,对富集条件进行了优化和考察,并在此基础上通过5种蛋白质酶切肽段混合物的富集对该方法进行了验证.结果证明此方法的重现性好,富集效率高,富集特异性好,能有效地富集鉴定含半胱氨酸肽段.所建立的方法在复杂体系的蛋白质组研究中具有广泛的应用前景,为复杂样品的蛋白质高通量、自动化、规模化鉴定和定量研究提供了实用技术.
关键词:
共价色谱
,
液相色谱-串联质谱
,
含半胱氨酸肽
,
富集
,
蛋白质组
高亮
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乔晓强
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梁振
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张丽华
,
霍玉书
,
张玉奎
色谱
建立了基于在线二维弱阴离子交换色谱-反相液相色谱(2D-WAX-RPLC)的蛋白质分离系统,并用于不同生长时期鹿茸的比较蛋白质组分析.以5种标准蛋白质的混合物为样品,考察了系统的重现性.通过改变标准蛋白质之间的浓度比,研究了该系统进行蛋白质相对定量的能力.在此基础上,针对4个不同生长时期的鹿茸样品,分别采用5种不同的方法进行蛋白质提取,经2D-WAX-RPLC分离后,收集各生长时期对应蛋白质的峰高最大比超过2的组分.酶解后,采用微柱反相液相色谱-串联质谱(μRPLC-MS/MS)进行肽段的分离鉴定;共从9个差异蛋白质峰中鉴定到了22个差异蛋白质.研究结果表明,利用基于蛋白质水平的在线二维液相色谱分离技术找寻差异蛋白质,具有重现性好、自动化程度高等优点,可用于开展比较蛋白质组学的研究.
关键词:
在线二维液相色谱
,
鹿茸
,
蛋白质组
,
不同生长时期
,
比较蛋白质组学
