钱浩李春蛟张莹雪林志勇
材料研究学报
用微悬浮共聚合技术实现了二乙烯基苯与醋酸乙烯酯单体对亲油性Fe3O4纳米粒子的充分包裹, 制备出超顺磁性的聚合物微球, 研究了分离人血清抗体的特异性.结果表明, 聚合物微球的粒径为0.6--20μm, 磁性微球的含量高于24%,饱和磁化强度为16.7 emu/g. 通过充分的水解反应, 在微球表面形成丰富的羟基,并通过Michael加成反应, 在磁性微球表面偶联嗜硫基团(乙烯基砜和巯基乙醇).用嗜硫性磁性微球直接从人血清中分离免疫球蛋白G, 表现出明显的特异性吸附行为.在分离过程中, 吸附行为表现出明显的盐依赖性, 硫酸钠能有效促进其特异性吸附能力.这种吸附行为对温度比较敏感, 在低温条件下吸附能力和分离效率皆降低.利用磁性微球技术的抗体纯化过程, 工艺条件简单, 分离条件温和, 抗体纯度较高,在规模化分离抗体方面表现出较大的潜力.
关键词:
有机高分子材料
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magnetic beads
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immunoglobulin G
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microsuspension polymerization
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isolation
唐君
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郭凯珠
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陈文东
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宋培培
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封顺
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胡巢凤
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许瑞莲
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田瑞军
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.09033
建立了基于Fe3O4/乙二胺四乙酸(EDTA)磁性粒子的集成化蛋白质组学研究方法.首先用共沉淀法合成EDTA负载的Fe3O4/EDTA磁性粒子.在优化的溶液条件下(95％乙腈-1％三氟乙酸,体积分数),100 μg Fe3O4/EDTA磁性粒子可吸附12.4μg牛血清白蛋白(BSA),吸附容量是商品化磁珠的10倍左右.以BSA作为标准蛋白质,对所合成的Fe3O4/EDTA磁性粒子作为蛋白质组学反应器的酶解时间进行了优化,发现Fe3O4/EDTA磁性粒子处理BSA酶解1、8和16h的肽段序列覆盖率和特征肽段结果相当.因此,可以将复杂的蛋白质样品前处理时间缩短至2h内.最后,将所合成的Fe3O4/EDTA磁性粒子应用于血清的蛋白质组学研究,成功地鉴定出218种蛋白质,其中包含了41种美国食品药品管理局(FDA)认证的生物标志物.所发展的基于Fe3O4/EDTA磁性粒子的蛋白质组学样品前处理方法将蛋白质样品预富集、还原、烷基化、酶解、多肽除盐和洗脱等步骤集成到一起,减少了样品转移和处理所造成的损失.这种技术具有快速、灵敏和易于操作的特点,可用于临床蛋白质组学研究.
关键词:
Fe3O4/乙二胺四乙酸(Fe3O4/EDTA)
,
磁性粒子
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蛋白质组学
,
样品前处理
