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剥离水滑石固载辣根过氧化物酶的研究

申延明 , 张少鹏 , 李士凤 , 刘东斌 , 樊丽辉

功能材料 doi:10.3969/j.issn.1001-9731.2013.17.004

采用共沉淀法制备乳酸插层MgAl 水滑石,在水中剥离后用于固载辣根过氧化物酶,制得水滑石固载酶,测试水滑石固载酶的稳定性和降解苯酚的性能。利用XRD、IR、UV-Vis等表征技术对制备的水滑石固载酶进行了表征,并对固载过程进行了分析。实验结果表明,加入磷酸缓冲溶液有利于剥离水滑石的固载,固载时剥离水滑石层板重构成磷酸根插层水滑石,而 H RP吸附在水滑石上。H RP 在水滑石上的固载过程符合拟一级动力学方程。由于水滑石具有无限延长的层板,为 H RP 的吸附提供了充足的表面积,在实验条件下,Langmuir 和Freundlich模型均较好地拟合了实验数据。H RP在水滑石上固载后,提高了其稳定性,新制备的固载酶处理苯酚的去除率在80%以上,循环使用3次后降解率依然可达50%左右。

关键词: 剥离水滑石 , 辣根过氧化物酶 , 酶固载 ,

HRP/H2O2催化间苯二酚和3,5-二羟基苯甲酸的聚合及其结构与性能的关系

吕生华 , 刘晶晶 , 王飞 , 李芳 , 张国运 , 胡静

功能材料

在辣根过氧化物酶(HRP)/H2O2的催化作用下间苯二酚(RE)和3,5-二羟基苯甲酸(DBA)通过自由基共聚反应生成酚类共聚物,研究了RE和DBA的配比对共聚物鞣剂性能的影响,用FT—IR、1↑HNMR、13↑CNMR、GPC和UV等方法对酚类共聚物的分子结构进行了表征。水溶液中HRP/H2O2催化自由基聚合反应的显著特征是共聚物的相对分子质量容易控制,酚类聚合物苯环直接相连,结构内存在较大的共轭体系。应用结果表明酚类聚合物具有较好的鞣制效果,鞣制后的皮革收缩温度(T5)达到了78.6℃,复鞣皮革非常柔软丰满。

关键词: 辣根过氧化物酶 , 酚类共聚物 , 自由基共聚合 , 鞣制机理

HRP引发酚类与淀粉接枝共聚物的制备及结构性能表征

吕生华 , 弓瑞 , 闫小亮 , 张国运

功能材料

降解淀粉和酚类在辣根过氧化物酶(HRP)/H2O2的催化作用下进行自由基接枝共聚反应,制备了淀粉和酚类接枝共聚物。研究了淀粉降解程度、酚类单体配比、HRP用量、反应温度和pH对接枝改性淀粉结构与性能的影响。研究结果表明,用α-淀粉酶降解后的淀粉15与12g间苯三酚(PG)和20g对羟基苯磺酸钠(HBS)在5mg HRP/H2O2引发体系下,在30℃及pH值为7.0时反应5h制备的酚类与淀粉接枝共聚物具有较好的性能,其水溶液的表面张力为26.6mN/m,所鞣制皮革收缩温度(Ts)达到了78℃。用FT-IR、1 H NMR、UV-Vis和GPC等方法对产物的化学结构进行了表征。

关键词: 辣根过氧化物酶 , 淀粉 , 酚类化合物 , 接枝共聚物

大分子拥挤条件下光诱导辣根过氧化物酶还原的光谱研究

曹洪玉 , 王珍 , 唐乾 , 郑学仿

影像科学与光化学 doi:10.7517/j.issn.1674-0475.2015.04.321

稀溶液中光诱导辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)能够发生还原反应,但这一研究忽略了生物体细胞内因存在各种分子而高度拥挤的真实环境.本文采用紫外可见、荧光、同步荧光及圆二色光谱法,研究了大分子拥挤环境中光诱导HRP的还原过程及外界环境对其光还原的影响.UV-Vis光谱和同步荧光光谱结果表明,采用403 nm单色光照射时,HRP在拥挤试剂葡聚糖70(Dextran70)中还原程度较好,而HRP在聚蔗糖70(Ficoll70)拥挤环境下不发生光还原反应;采用280 nm单色光照射时,在拥挤试剂DextranT0和Ficoll70中HRP光还原反应程度增加,且HRP的光还原程度在Ficoll70溶液中远高于在Dextran70溶液中;光诱导HRP还原的最适温度在Dextran70和Ficoll70环境中分别为4℃和24℃;HRP在Dextran70溶液中的最佳光还原浓度是100 g/L,在Ficoll70环境中HRP还原程度随着Ficoll70浓度的增加而增大;CD光谱结果表明拥挤环境中HRP被光还原后,蛋白的二级结构基本没有变化.

关键词: 大分子拥挤环境 , 辣根过氧化物酶 , 光照还原 , 光谱法

基质辅助激光解吸电离质谱和电喷雾电离质谱在辣根过氧化物酶糖肽结构分析中的应用

陈瑶函 , 晏国全 , 周新文 , 杨芃原

色谱

糖链结构的质谱解析是今后糖蛋白分析中的重要研究内容,其中完整糖肽的分析,由于可以同时获得糖基化位点和对应糖链的结构信息,更具有重要意义和研究前景.本工作对质谱软电离技术在完整糖肽分析中的应用进行了研究,其中包括了基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laser desorption ionization,MALDI)和电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)技术.通过平行使用两种串联质谱(tandem mass spectrometry,MS/MS)分析策略:MALDI-MS/MS和ESI-MS/MS对目标糖蛋白--辣根过氧化物酶进行分析,并讨论了其互补性.结果表明,MALDI和ESI技术各有优劣,结合串联质谱分析,可获得糖肽的糖链结构信息;两条路线互补使用,在揭示蛋白质糖基化修饰(位点和结构)的研究中十分必要.

关键词: 基质辅助激光解吸电离质谱 , 电喷雾电离质谱 , 串联质谱 , 液相色谱 , 辣根过氧化物酶 , 糖肽

一步电沉积法构建辣根过氧化物酶传感器

杨绍明 , 陈延胜 , 李瑞琴 , 龙启洋 , 丁素游

应用化学 doi:10.11944/j.issn.1000-0518.2015.07.140401

在恒电位沉积钴铝水滑石(CoAl-LDH)时将辣根过氧化物酶(HRP)和碳纳米管(CNTs)固定于基底电极表面,构建CoAl-LDH-HRP-CNTs修饰电极并用于过氧化氢的检测.利用SEM对电化学沉积的CoAl-LDH-HRP-CNTs的形貌进行了表征.采用电化学阻抗对所制备的电极进行了表征.用循环伏安法对电极的电化学行为进行了研究.探讨了pH值和测定电位对修饰电极的催化还原性能的影响.该传感器对过氧化氢的检测在2.5×10-6~3.35×10-4 mol/L范围内呈良好的线性关系,灵敏度为0.0049 A·L/mol.

关键词: 钴铝水滑石 , 碳纳米管 , 辣根过氧化物酶 , 电沉积 , 传感器

高能电子束对模式蛋白辣根过氧化物酶的损伤机制研究

麻姗姗 , 柯志刚 , 黄青

原子核物理评论 doi:10.11804/NuclPhysRev.33.01.088

作为一种载能粒子,高能电子束具有能量利用率高、贯穿深度大、方便实用等优点,可以用来杀灭细菌和抑制病原体生长,因而被广泛应用于食品保质储藏和医疗卫生等方面。但是,对于高能电子如何与生物及其生物分子发生作用,以及作用的过程、方式、效果和机理等方面,人们还缺乏深入、细致的了解。本研究利用高能电子束辐照模式蛋白酶辣根过氧化物酶(HRP:horseradish peroxidase),研究了电子束对它的损伤作用和机理。研究发现,电子束损伤HRP的方式主要通过羟基自由基破坏蛋白质肽链,同时,辐照产生的活性氧物质也会作用于HRP分子活性中心引起其辅基血红素的损伤。这与我们以前研究的等离子体放电辐照HRP其损伤主要通过H2O2作用于变性蛋白血红素引起酶失活有所不同。进一步,通过利用活性氧和自由基清除剂的方法,具体分析和阐明了电子束辐射条件下不同活性氧和自由基在损伤HRP过程中所起的破坏作用。

关键词: 辣根过氧化物酶 , 高能电子束 , 低温常压等离子体 , 光谱

共固定化辣根过氧化物酶的最新研究进展

陈培策 , 张朝晖 , 谢雪凤

材料导报

辣根过氧化物酶广泛应用于分析检测、有机合成、生物转化和食品工业等领域,目前对辣根过氧化物酶的研究主要集中在生物传感器领域.综述了近年来辣根过氧化物酶与其他酶以及非酶物质共固定化研究的最新进展,如葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶和L-谷氨酸氧化酶等酶以及亚甲基蓝、琉瑾和苯胺红等非酶物质,展望了辣根过氧化物酶共固定在其他领域如有机合成领域的应用.

关键词: 辣根过氧化物酶 , 共固定 , 酶工程

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