陈丽宇
,
张立坚
,
张良滔
,
蔡春
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.12015
5-羟甲基胞嘧啶通过阻止脱氧核糖核酸(DNA)甲基化转移酶l(DMNT1)甲基化胞嘧啶来影响DNA甲基化的程度.本文建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定组织中全基因组5-羟甲基胞嘧啶水平的方法.采用苯酚-氯仿提取组织DNA.提取的DNA用88％甲酸在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,加乙腈(9:1.v/v)溶解,用LC-MS/MS检测5-羟甲基胞嘧啶的含量,并计算全基因组中5-羟甲基胞嘧啶的水乎.结果表明,5-羟甲基胞嘧啶的线性范围为0.1～30 ng/mL,相关系数为0.996 9,检出限(信噪比为3计)和定量限(信噪比为10计)分别为0.057 ng/mL和0.090 ng/mL;日内相对标准偏差和日间相对标准偏差分别为5.13％和6.24％；加标回收率为90.24％～97.53％.用该方法检测了大鼠大脑组织DNA羟甲基化水平,平均结果为0.66％.该方法简便,重现性好,灵敏度较高,能满足全基因组5-羟甲基胞嘧啶定量检测的要求.
关键词:
液相色谱-串联质谱
,
5-羟甲基胞嘧啶
,
脱氧核糖核酸羟甲基化
,
组织
木晓丽
,
张洁
,
彭思远
,
王晓雪
,
申河清
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.03025
测定全基因组 DNA甲基化和羟甲基化水平对于研究环境污染物暴露的影响及致病机理具有重要的作用。本文建立了液相色谱-串联质谱（ LC-MS/MS）同时测定动物组织中全基因组 DNA 甲基化和羟甲基化水平的方法。从动物组织样品中提取 DNA，并将其酶解成单核苷，利用液相色谱-串联质谱法测定5-甲基胞嘧啶核苷、5-羟甲基胞嘧啶核苷和鸟嘌呤核苷的含量，计算全基因组 DNA甲基化率和羟甲基化率。利用该方法研究了砷暴露对大鼠肝脏和小脑全基因组 DNA甲基化和羟甲基化水平的影响，得到了砷影响 DNA甲基化及羟甲基化的初步数据。该方法具有良好的重现性、灵敏度和稳定性，可以同时检测差异较大的 DNA 甲基化和羟甲基化水平。为同时研究DNA甲基化和羟甲基化水平提供了有力的支持。
关键词:
液相色谱-串联质谱
,
5-甲基胞嘧啶
,
5-羟甲基胞嘧啶
,
动物组织
