皮文辉
,
孙从建
,
宋志强
,
马连营
,
刘淑萍
,
白丁平
,
蔡宜东
,
刘守仁
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.06.004
采用Fractogel(R) EMD TMAE(M)强阴离子交换介质分离纯化质粒脱氧核糖核酸(DNA),该介质对质粒DNA的动态载样量达0.62 mg/mL.用Triton X-114或Triton X-100预先处理质粒DNA的裂解澄清液后,经阴离子交换色谱分离纯化获得的质粒DNA中内毒素含量分别为6.42 EU/mg和9.50 EU/mg,显著低于未经Triton处理的裂解澄清液(67.82 EU/mg).该法实现了阴离子交换色谱一步纯化质粒DNA的目的,具有简便、省时、成本低等特点.
关键词:
阴离子交换色谱
,
纯化
,
质粒DNA
,
Triton X-114
,
Triton X-100
,
内毒素
,
去除
吴鹏
,
杨晓燕
,
边六交
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.01.001
为了能从中华眼镜蛇蛇毒中简单快速地分离纯化神经生长因子(一种治疗各种神经性损伤和神经退行疾病的药物,简称NGF),采用不同的色谱柱联用的方式对NGF的纯化工艺进行了研究.结果表明,采用DEAE-Sepharose F.F.和Sephadex G-50二步柱色谱工艺可以从蛇毒中快速分离得到神经生长因子.经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高效液相色谱分析, 证明所得到的NGF为单一组分,相对分子质量约为29 000.对8 d龄鸡胚背根神经节采用体外培养法,结果证明,所得NGF具有明显的促进神经纤维生长的生物活性.
关键词:
阴离子交换色谱
,
凝胶排阻色谱
,
神经生长因子
,
中华眼镜蛇蛇毒
,
分离
,
纯化
王宾香
,
时祥柱
,
郭春腾
,
叶秀云
,
王中来
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.05.018
将阴阳离子交换色谱柱在灌注色谱工作站上串联,使苦瓜籽粗提液中未被阴离子色谱柱吸附的蛋白质直接在阳离子色谱柱上吸附,用盐线性梯度洗脱从阳离子色谱柱上分离出两个具有抗真菌活性的蛋白.两个抗真菌蛋白经鉴定都达到了电泳纯,相对分子质量均为30 000左右,N-端氨基酸序列分别为DVSFRLSGADPRSYGMFI与DVNFDLSTATAK,表明所得到的两种蛋白为苦瓜籽中的2个Ⅰ型核糖体失活蛋白α-苦瓜素(α-MMC) 和β-苦瓜素(β-MMC).抗菌实验表明,α-MMC对香蕉枯萎菌和果腐霉菌均具有较强的抑制作用,β-MMC对果腐霉菌有较强的抑制作用,而α-MMC和β-MMC对白绢菌的抑制活性均不明显.采用串联色谱,α-MMC和β-MMC的质量回收率分别为13.8%和8.0%.
关键词:
阴离子交换色谱
,
阳离子交换色谱
,
串联色谱
,
苦瓜籽
,
纯化
,
核糖体失活蛋白
田亚平
,
章克昌
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.03.013
采用乙醇分级沉淀、凝胶色谱纯化、阴离子交换色谱分离等步骤从灵芝深层发酵液中提取得到蛋白酶抑制剂GLPIA1与GLPIA2.其中GLPIA2仅在215 nm处有紫外吸收,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一条带,相对分子质量为15000.由其氨基酸组成分析谱图可看出,其酸性氨基酸含量较高,碱性氨基酸及芳香族氨基酸含量较低.GLPIA2抑制剂的底物特异性研究表明,它对天冬氨酸族的胃蛋白酶和酵母蛋白酶A有相对较强的抑制作用.
关键词:
凝胶色谱
,
阴离子交换色谱
,
纯化
,
蛋白酶抑制剂
,
灵芝
,
深层发酵
张耀东
,
杨伯伦
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.01.010
提出了一种从基因工程毕赤酵母(Pichia pastoris)培养液中分离纯化重组巴西日圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)乙酰胆碱酯酶(NbAChE)的方法.采用Q-Sepharose Fast Flow强阴离子交换色谱柱对重组NbAChE进行了分离纯化.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,纯化物的活性峰为单一蛋白质带,其相对分子质量约为66000.该方法的活性回收率为52.6%,纯化因子为3.87;纯化后AChE的比活为2 837 U/mg.结果表明,该法是一种理想的分离纯化重组NbAChE的方法.
关键词:
阴离子交换色谱
,
乙酰胆碱酯酶
,
毕赤酵母
,
培养液
,
分离
,
纯化
周勃
,
边六交
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.03.025
为了从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白,建立了通过超滤、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶排阻色谱三步法制备高纯度猪血红蛋白的方法,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效凝胶排阻色谱和反相高效液相色谱方法,对纯化后的猪血红蛋白进行了鉴定.经三步分离纯化后,猪血红蛋白的纯度大于99% ,含量为1.328 g/L.
关键词:
超滤
,
阴离子交换色谱
,
凝胶排阻色谱
,
猪血红蛋白
,
分离
,
纯化
孙嘉怡
,
任军
,
徐丽
,
贾凌云
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00872
依据单胺氧化酶B(monoamine oxidase B, MAOB)的疏水特性,建立了一种从猪肝中分离纯化MAOB的新方法.用含有1% Triton X-100的膜蛋白裂解液制备粗酶,以饱和度为20%～50%的硫酸铵反抽提进行粗提,再利用自制的配基密度为75.7 μmol/mL的苯基疏水色谱及Sepharose Q High Performance离子交换色谱进一步分离纯化,得到纯化倍数为18.2、酶比活为135 U/mg的MAOB.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示为相对分子质量约60 000的单一蛋白质带.采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱对该酶进行鉴定,证实为MAOB.本研究所用分离纯化方法可以有效纯化MAOB, 为MAOB的深入研究提供技术支撑.
关键词:
苯基配基
,
疏水色谱
,
阴离子交换色谱
,
单胺氧化酶B
,
猪肝
秦宗华
,
陈婷
,
李任强
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.04002
动物血清中免疫球蛋白和白蛋白的等电点分别约为7.8和4.8,根据它们等电点的较大差别,利用Q SepharoseTM-xL强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱同时分离纯化这2种蛋白.以0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液平衡离子交换色谱柱并将已稀释10倍的高免疫的兔血清上样,采用pH分段洗脱.在pH 6.0时以0.3mL/min低流速洗脱得到高纯度的免疫球蛋白,继续在pH 4.0时洗脱,再辅以Sephadex G-75分子排阻色谱可获得纯度大于95％的白蛋白.对纯化后的蛋白进行活性检测,证明所纯化的免疫球蛋白和白蛋白都保持正常的生物活性.蛋白质含量测定说明免疫球蛋白的纯化回收率达到95％以上,而白蛋白的纯化回收率大于90％.该法简便快速,可同时从动物血清中纯化出保持生物活性的免疫球蛋白和白蛋白,纯化效率高.
关键词:
阴离子交换色谱
,
分子排阻色谱
,
免疫球蛋白
,
白蛋白
,
动物血清
,
纯化
黄宇
,
任皓威
,
刘彪
,
刘宁
,
李萌
,
王东茂
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.01010
以新鲜中国人乳为研究对象,在酸性条件下加氯化钙分离酪蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果.从pH值、离心力和CaCl2浓度等3个方面对分离效果进行评价.结果表明:当pH =4.3,离心力为10 400 g,CaCl2溶液浓度为60 mmol/L时,分离得到的酪蛋白组分纯度最高.对所得酪蛋白沉淀进行DEAE阴离子交换色谱分离,得到3个洗脱液.对其中第3个峰进行Western-Blot法及基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱法(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定,证明该峰能与人β-酪蛋白抗体特异性结合,确认其为人乳β-酪蛋白；将质谱结果在Mascot数据库中进行数据检索,序列覆盖率为50％,进一步确定其为人乳β-酪蛋白.综上所述,我们建立了能够得到符合蛋白质组学研究要求的人乳β-酪蛋白的方法.
关键词:
阴离子交换色谱
,
质谱
,
β-酪蛋白
,
纯化
,
中国人乳
