郭明明
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王俊玲
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吴彦卓
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徐明波
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高向东
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.08018
为了获得一种优良的抗体纯化介质,制备了重组金黄色葡萄球菌蛋白A( rProtein A)亲和填料,并考察了所制备的亲和填料的纯化性能.利用自行构建的rProtein A工程菌,经诱导表达、纯化获得rProtein A纯品,将其偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 4 Fast Flow凝胶上,得到rProtein A亲和填料,并使用兔抗尿酸氧化酶抗体对该填料的性能进行验证.结果显示,在自制的rProtein A亲和填料上rProteinA浓度为1.5×10-4 mol/L.采用Scatchard模型分析,得到其解离常数和最大表观吸附量分别为2.28×10-7 mol/L和20.697 g/L,说明制得的rProtein A亲和填料对抗体有很好的结合能力.将该填料于0.1 mol/L NaOH溶液中浸泡1h,其色谱性能未见变化.将该填料用于纯化兔抗体,湿胶结合抗体量可达19 mg/mL；一步柱色谱即可得到电泳纯度的抗体样品,回收率高于96％.本研究为rProteinA亲和填料的国产化奠定了基础.
关键词:
重组金黄色葡萄球菌蛋白A
,
亲和填料
,
制备
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纯化
,
抗体
