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纳米羟基磷灰石/壳聚糖-明胶复合支架材料缓释基因的研究

刘劲松 , 张华林 , 王琪 , 杨俊 , 高宁 , 陈治清

稀有金属材料与工程

用冷冻干燥法制备不同比例的纳米羟基磷灰石/壳聚糖-明胶(n-HA/CS-Gel)三维多孔支架材料,加入含骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因的质粒后再次冷冻干燥,制成具有基因缓释功能的组织工程支架材料.对支架材料的形貌结构、力学性能、体外降解特性、质粒的体外释放特性及质粒完整性进行检测.结果显示:纳米羟基磷灰石均匀分散在支架材料中,随着其含量的增加,孔隙率减少,抗压强度提高,在体外降解速度减慢.质粒DNA在体外1~3d快速释放,并能够维持释放5周以上,随着纳米羟基磷灰石含量的增加,释放时间延长,释放出的质粒DNA能够保持完整性.具有基因缓释功能的n-HA/CS-Gel支架材料是一种有望用于临床的新型骨组织工程支架材料.

关键词: 纳米羟基磷灰石 , 壳聚糖 , 明胶 , 质粒 , 组织工程

骨形成蛋白-2基因修饰的β磷酸三钙/胶原复合材料修复颅骨缺损

李娟 , 郑闱颖 , 卢岩 , 俞兰 , 林军

材料科学与工程学报

目的构建骨形成蛋白2(Bone morphogenetic proteins2,BMP-2)基因修饰的β磷酸三钙(βtricalcium phosphate,β-TCP)/胶原复合支架材料,探讨其体内修复大鼠临界颅骨缺损的效果,评价其作为骨缺损修复材料的性能.方法 制备纳米级多孔3-TCP/胶原支架,并负载100μg BMP-2质粒DNA形成基因修饰的支架材料.将24只成年雄性SD大鼠随机分为BMP-2基因修饰的β-TCP/胶原支架组(n=8),3-TCP/胶原支架组(n=8),空白组(n=8).在大鼠颅骨顶部建立两个直径5mm的临界性骨缺损,植入材料后6周、12周取样本大体观察,组织学观察,免疫组织化学检测,并进行骨组织测量分析.结果 组织学观察可见12周时,材料已完全降解.BMP-2基因修饰支架组6周时,骨缺损区成骨活跃形成编织骨;12周时,骨缺损已基本愈合,新生骨组织逐渐成熟呈板层状,与宿主骨形成骨性连接.而单纯支架组6周时,骨缺损中心区为少量岛状骨组织;12周时,新生骨组织连接呈片状,骨缺损未完全愈合.免疫组化检测显示:6周和12周时,BMP-2基因修饰支架组中BMP-2表达均强于单纯支架组和空白组.骨组织形态计量分析显示BMP-2基因修饰支架组成骨质量和成骨效率明显高于单纯支架组和空白组(P<0.05).结论 BMP 2基因修饰的β-TCP/胶原复合材料具有良好的生物相容性,骨诱导和骨传导性佳,是很有潜力的新型骨缺损修复材料.

关键词: 3磷酸三钙 , 胶原 , 骨形成蛋白2 , 质粒 , 骨缺损

巯基吡啶配基液相色谱固定相的制备及其对质粒的快速纯化

李渊 , 窦国胜

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.06.006

在基因治疗中,质粒是一种常用的非病毒型载体.由于目前市场上对质粒的需求量很大,因此有必要开发大规模的质粒制备技术.该文以双孔型流通色谱介质为基质,以巯基吡啶为配基,制得了液相色谱固定相,并考察了其对质粒DNA的纯化效果,分析了分离机理.结果表明:该分离介质对质粒的纯化是基于疏水作用;当上样量为10 mL(质粒质量浓度为0.30 mg/mL)、流速高达4 mL/min时,质粒仍然能以100%的收率实现纯化,其纯度为100%.该色谱介质对RNA的柱容量高达2.2 mg/mL.

关键词: 巯基吡啶配基 , 双孔型流通色谱固定相 , 质粒 , 快速纯化

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