魏强
,
杨歌
,
管桦
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.10025
平衡混合物的非平衡毛细管电泳(NECEEM)可用于测定复合物的解离常数(Kd).该文以单链脱氧核糖核苷酸结合蛋白(SSB)和单链脱氧核糖核苷酸(ssDNA)相互作用为模型,分析了相互作用强弱的电泳图谱特征,测定了不同条件下复合物的Kd,建立了基于积分偏差的误差分析方法.结果表明,SSB与ssDNA相互作用强弱所致的电泳图差异、SSB与ssDNA的浓度比、毛细管分离温度均影响Kd的计算.此外,基于25 ℃时SSB与5′-GGTTGGTGTGGTTGG-3′(15mer)人凝血酶适配体作用模型的数值分析结果表明,在现有实验条件下,手动积分峰面积时产生的面积偏差对Kd计算结果有影响,但在10%的偏差区间内,所求Kd值的最大相对偏差小于7%,所求Kd值的误差可忽略.该文证实了基于NECEEM求解动力学相关参数的方法可靠.
关键词:
动力学毛细管电泳
,
单链脱氧核糖核苷酸结合蛋白
,
解离常数
,
积分偏差
