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荧光各向异性法均相检测酸性、中性和碱性介质中的蛋白酶

田嘉嘉 , 陈爽 , 李东辉

应用化学 doi:10.3969/j.issn.1000-0518.2006.12.002

建立了一种基于荧光各向异性原理均相测定蛋白酶及其抑制剂的方法. 具有如下特点:灵敏度高(可测到纳克级的蛋白酶);是一种均相检测方法,可对酶反应体系进行实时跟踪检测;作用底物是蛋白酶的天然底物-蛋白质;适用的pH值范围宽(pH 2.0~10.0),可用于酸性、中性和碱性介质中蛋白酶的测定;所用荧光标记物TMRITC的发射波长(581 nm)大于荧光素类(520 nm),有利于减少散射光的干扰,提高了荧光各向异性测量的稳定性. 还可应用于蛋白酶抑制剂的检测.

关键词: 荧光各向异性 , 罗丹明 , 蛋白酶 , 蛋白酶 , 蛋白酶 , 菠萝蛋白酶 , 蛋白酶抑制剂

海洋产蛋白酶细菌发酵液防污活性研究

张晓 , 陈西广 , 段东霞 , 蔺存国

材料开发与应用

传统的防污剂对海洋环境造成严重污染,随着环保意识的增强以及相关规定的制订,各国竞相开展新型无毒防污剂的研究.本文以海洋产蛋白酶菌株发酵产物为活性物质,研究蛋白酶粗提物对污损生物硅藻(navicula sp.)和贻贝(mytilus edulis)附着行为的影响.结果表明,所研究菌株的发酵液对硅藻(navicula sp.)和贻贝(mytilus edulis)的附着有明显抑制作用.贻贝(mytilus edulis)毒性实验显示,细菌发酵液对贻贝无毒.因此,海洋微生物蛋白酶产生菌粗酶提取物可以作为环保型防污功能添加剂.

关键词: 蛋白酶 , 海洋细菌 , 硅藻 , 贻贝 , 防污

试卤灵类光学探针的研究进展

李照 , 马会民

影像科学与光化学 doi:10.7517/j.issn.1674-0475.2014.01.060

光学探针是指与目标物质发生反应(包括配位、包合和基团反应等)并引起光学(吸光、荧光或发光)性质的变化,基于这些变化从而可对目标物质进行分析与测定的一类特殊试剂.光学探针不仅能改善分析的灵敏度,而且能大幅度提高对样品的时空分辨能力,因此,长期以来一直受到人们的关注.试卤灵为一性能优良的荧光体,特别是其7-羟基的取代作用通常会封闭光信号;这一特性近年引起了人们的兴趣,并被广泛用于构建具有低背景光信号的新型探针.本文将综述试卤灵类光学探针的发展及其在蛋白酶、离子、活性氧物种分析方面的应用,包括探针分子的构筑、检测机理以及生物成像等方面的研究.

关键词: 光学探针 , 试卤灵 , 蛋白酶 , 离子 , 活性氧物种 , 荧光成像分析

蚕丝丝素材料的生物降解性能

李明忠 , 张剑 , 邱玉华 , 卢神州

中国材料进展 doi:10.7502/j.issn.1674-3962.2015.07.11

蚕丝丝素材料植入体内后的降解可直接造成其形态和结构变化、力学性能和质量下降.降解产物与组织反应或全身反应的程度密切相关.用于组织工程和再生医学的丝素支架材料的生物降解速率应与组织再生速率相匹配;用于药物控制释放系统的丝素载体的生物降解速率应与生物活性物质的释放需要相适应.概述了近年来对丝素材料生物降解问题的研究现状,介绍了通过体外、体内实验所观察到的丝素材料生物降解行为,包括天然丝素纤维、再生丝素纤维、多孔支架及薄膜等,总结了未来需要进一步研究的问题.指出蚕丝丝素作为一种蛋白质可被多种蛋白酶催化水解;天然丝素纤维比再生丝素材料的生物降解速率慢;丝素的分子构象、结晶度、交联程度、材料的形态等对丝素的降解速率有明显影响;建立预测丝素材料生物降解程度与其功能变化以及与机体应答关系的研究模型和技术,有效调控其生物降解速率,将是未来的研究方向.

关键词: 蚕丝 , 丝素 , 生物降解 , 蛋白酶 , 丝素多孔材料

酪蛋白多肽的制备和色谱分离方法

蔡焕新 , 殷宝茹 , 姚萍

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00637

为了得到低成本的多肽,本文利用胰蛋白酶对酪蛋白进行了充分的酶解.采用分析级反相高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(RP-HPLC/ESI-MS)分析了酶解产物各组分的组成,并通过改变流动相的梯度洗脱程序,优化了分析级色谱条件以充分分离相对含量较高的多肽组分;将优化的分析级色谱条件直接放大到制备级RP-HPLC中,在程序控制下通过紫外吸收信号结合ESI-MS信号共同引导实现了多肽的全自动化分离和收集.整个过程方便快捷,经过这样一个单一的分离步骤,得到了多个纯度较高的多肽.除此之外,本文还考察了流动相的酸碱性、柱上样量等因素对该体系制备级分离的影响,并对一次分离中分辨率不好的亲水性多肽混合物进行了二次分离,得到了多个新的多肽.本文建立的多肽制备方法为多肽和多肽材料的广泛应用提供了一种选择.

关键词: 高效液相色谱-电喷雾质谱法 , 制备级色谱 , 多肽 , 酪蛋白 , 蛋白酶 , 低成本

污泥减量菌剂及其水解污泥条件优化

汪顺丽 , 查君茹 , 张宏才 , 魏荷芬 , 胡子全 , 赵海泉

环境化学 doi:10.7524/j.issn.0254-6108.2016.04.2015110202

为获取高效降解污泥胞外聚合物的优势菌种以用于最大程度使污泥减量化,从合肥望塘污水厂活性污泥中筛选3株具有高效代谢淀粉酶和蛋白酶的菌株SL-10、SL-11和SL-16.通过形态特征、16S rRNA gene序列分析和系统发育分析,菌株SL-10、SL-11和SL-16分别鉴定为枯草芽孢杆菌属(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌属(Bacillus amyloliquefaciens)、巨大芽孢杆菌属(Bacillus megaterium).以污泥SCOD为指标,通过正交实验确定污泥减量菌剂各菌株最佳配比为SL-10∶SL-11∶SL-16=3∶2∶1,菌剂培养条件优化实验确定最佳培养时间为32 h,最佳培养温度为35℃,发酵培养基最适初始pH值为6.0,发酵最适装液量为80 mL/250 mL.优化污泥减量菌剂培养条件后用于处理污泥,确定处理时间为150 min,此时SCOD为841.19 mg· L-1,VSS为2316.54 mg·L-1,VSS溶解率为24.51%.

关键词: 污泥减量菌剂 , 蛋白酶 , 淀粉酶 , 污泥 , 水解

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