闵一
,
陈刚
,
耿信笃
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.05.025
依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱(HIC)分离整体蛋白的影响.首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的"条件板高"(H)概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征.分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的"条件板高"对流动相线速(u)的曲线图.发现对应于色谱柱最低"条件板高"的适合线速约为色谱饼的1/5～1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多.据此,用装填有HIC填料的色谱饼(10 mm×20 mm i.d.)在12 min内便可完全分离7种标准蛋白.还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化,在50 min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39% ,比活＞1×108 IU/mg.可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到"三高".
关键词:
疏水相互作用色谱
,
蛋白分离
,
分离度
,
色谱饼
,
动力学因素
,
生物工程
,
粒细胞集落刺激因子
杨彬
,
叶卉
,
刘琦
,
李安妮
,
张玉忠
,
赵莉芝
,
李泓
膜科学与技术
doi:10.16159/j.cnki.issn1007-8924.2016.03.008
采用膜技术对蛋白质进行分离纯化已受到生命科学领域的广泛关注,而智能开关膜为蛋白质精细分离提供了新的解决方案.本文以接枝甲基丙烯酸-N,N-二甲氨基乙酯(DMAEMA)的乙烯-乙烯醇共聚物(EVAL)分离膜为智能开关膜,对其开关特性与蛋白分离性能进行了研究.结果表明,EVAL接枝膜渗透通量具有显著的开关性,且pH交替重复6个单元以后开关性能保持稳定.在模拟蛋白分子牛血清白蛋白(BSA)与溶菌酶(LZM)及混合模拟蛋白分子BSA与LZM分离过程中,接枝率为15％的EVAL接枝膜在pH3.6的条件下对BSA与LZM分离效果最佳,分离系数分别为9.7和7.8.
关键词:
智能开关膜
,
pH响应性
,
乙烯-乙烯醇共聚物
,
蛋白分离
