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脂肪酶催化乳酸与乙醇合成乳酸乙酯的反应动力学

赵天涛 , 张丽杰 , 高静 , 黄志红 , 全学军

催化学报

对脂肪酶催化乳酸与乙醇合成乳酸乙酯反应的动力学进行了研究,根据乒乓机制和双底物抑制的特性建立了反应速率方程. 反应时间常数(tR)和扩散时间常数(tD)的计算结果表明,酯化反应速率未受到明显的限制. 反应速率方程可以很好地预测实验结果,由非线性拟合得到的动力学参数中,乳酸(A)和乙醇(B)的抑制常数分别为KiA=10.7 mmol/L和KiB=275.0 mmol/L. 这说明乳酸作为短链极性脂肪酸,对酶的失活作用远大于乙醇. 乳酸在微液层中聚集并产生了使酶失活的低pH值环境,同时在酯化反应中存在竞争性抑制作用.

关键词: 反应动力学 , 脂肪酶 , 酶催化 , 乳酸 , 乙醇 , 乳酸乙酯 , 竞争性抑制 , 扩散限制

粘质沙雷氏菌脂肪酶的固定化及催化拆分反式3-(4'-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯

龙章德 , 许建和 , 潘江

催化学报

对粘质沙雷氏菌脂肪酶进行了固定化研究,确定硅藻土和环氧树脂Eupergit C是较好的固定化载体. 固定化后酶的热稳定性、 pH稳定性及储存稳定性均明显提高. 以Eupergit C共价固定的脂肪酶,其操作稳定性比硅藻土吸附酶好,重复使用10批次后,剩余酶活力还有50%左右,戊二醛交联对Eupergit C固定化酶稳定性的提高没有明显效果,而硅藻土吸附酶经戊二醛交联后稳定性有所提高,经5批次反应后剩余酶活力还有50%. 使用交联后的硅藻土固定化酶(1 g, 200 U), 在两相搅拌反应器(工作体积200 ml, 甲苯∶水体积比=1)中对地尔硫卓手性前体(±)-反式3-(4'-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯((±)-MPGM)(有机相浓度为0.5 mol/L)进行了催化拆分,经5批次反应后,共得纯(2R,3S)-(-)-MPGM 18.6 g, 产品光学纯度(对映体过量)>99%, 总收率为37.2%.

关键词: 粘质沙雷氏菌 , 脂肪酶 , 固定化 , 对映选择性水解 , 反式3-(4'-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯 , 硅藻土 , 环氧树脂 , Eupergit C

微波辐射对酶促合成甘油酯位置选择性的影响

孙诗雨 , 方云 , 闵瑞 , 夏咏梅

应用化学 doi:10.3969/j.issn.1000-0518.2007.07.011

研究了微波辐射和常规加热下脂肪酶Novozyme 435催化甘油与n-辛酸的反应.在2种加热模式下.n-辛酸与甘油反应的初速度随着反应温度(50~75℃)的升高而加快;同样条件下,微波辐射下的反应初速度略高于常规加热条件下的.微波辐射的产物中的2-单甘酯和1,2-二甘酯的含量增加,但仍明显低于1-单甘酯和1,3-二甘酯的含量,即微波辐射并未根本改变脂肪酶的1,3-专一性;但实验条件下微波辐射均削弱了Novozyme 435的1,3-专一性:微波辐射反应产物中1-单甘酯与2-单甘酯的量比由常规加热下的26.9-43.4下降为16.2~40.4,其中1,3-二甘酯与1,2-二甘酯的量比亦由10.5~19.6降为7.6~15.3.

关键词: 微波 , 专一性 , 辛酸 , 甘油 , 甘油酯 , 脂肪酶 , 位置选择性 , 酯化

华根霉全细胞脂肪酶催化合成油酸油醇酯

金亮 , 徐岩 , 曹光群

催化学报

比较了10种不同来源的脂肪酶催化油酸与油醇酯化合成油酸油醇酯的能力,其中华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021全细胞脂肪酶的催化能力最强,其反应转化率可达到90%以上.酯化反应的最佳油酸/油醇底物摩尔比为1.5, 最佳油酸浓度为0.3 mol/L, 细胞干粉含水量为3.0%~7.5%时对酯化反应最为有利.以生物相容性指数logP值为指标选择不同的有机溶剂作为有机相进行酯化反应,发现logP值为3.5~4.5的有机溶剂促进酯化效果较好.全细胞脂肪酶的pH适应范围很广,最佳pH在9.0左右;最佳反应温度为30 ℃.

关键词: 华根霉 , 脂肪酶 , 生物催化 , 油酸 , 油醇 , 酯化 , 油酸油醇酯

纳米-微米复合孔泡沫陶瓷固定化脂肪酶

黄磊 , 程振民

催化学报

考察了泡沫陶瓷的孔径分布和表面性质对脂肪酶固定化的影响. 研究表明,泡沫陶瓷的纳米孔孔径分布非常适合脂肪酶的固定化,对固定化酶的催化效率有决定性的影响. 经 1 h 的定化,泡沫陶瓷固定化酶的活性达商业化硅藻土固定化酶的1.33倍,体积活力为其2.63倍,蛋白载量为45.36 mg/g陶瓷,比活为 1 215.39 U/g, 活力回收为41.2%. 泡沫陶瓷固定化脂肪酶在有机相乙酸乙酯合成中表现优良,连续使用5次,每次反应 3 h, 乙酸转化率均在93%左右.

关键词: 泡沫陶瓷 , 脂肪酶 , 酶固定化 , 酯合成 , 载体

紫外分光光度法表征Lipozyme TL IM脂肪酶转酯化活性

付显锋 , 郑建永 , 应向贤 , 鄢洪德 , 汪钊

催化学报 doi:10.1016/S1872-2067(14)60053-X

建立了一种新的有机相脂肪酶转酯化活性测定方法。以正己烷为溶剂,脂肪酶催化棕榈酸对硝基苯酯和正丁醇的转酯化反应为模型反应,通过测定反应液中310 nm下吸光值的变化计算反应转化率。以气相色谱法对新建的紫外分光光度法进行验证,分别采用这两种方法测定了七种商品化脂肪酶的转酯化活性,两种方法所得实验结果基本一致。利用紫外分光光度检测法考察了Lipozyme TL IM脂肪酶催化转酯化的时间进程及合成活性与酶量的关系,并对Lipozyme TL IM催化转酯化的性质(最适溶剂、酰基受体特异性、醇耐受性、最优反应温度和热力学稳定性)进行了表征。

关键词: 脂肪酶 , Lipozyme TL IM , 转酯化活性 , 紫外分光光度法 , 棕榈酸对硝基苯酯 , 有机溶剂

固定化脂肪酶聚合物膜的改性及脂肪酶膜反应器的应用

彭立凤 , 刘新喜 , 杨国营 , 高文玲 , 谭天伟

膜科学与技术 doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2001.02.011

综述了在聚合物膜上固定化脂肪酶的方法及脂肪酶膜反应器的应用.重点讨论了纤维素膜、聚丙烯腈膜和聚砜膜表面的化学改性途径及其与脂肪酶的偶联方法.

关键词: , 膜反应器 , 脂肪酶 , 酶反应器

有机相中利用脂肪酶催化的醇解反应拆分炔丙醇酮乙酸酯

程咏梅 , 吴坚平 , 徐刚 , 杨立荣

催化学报 doi:10.3724/SP.J.1088.2010.90831

研究了有机相中脂肪酶催化的炔丙醇酮乙酸酯的立体选择性醇解反应,考察了碱的种类、酰基受体和溶剂等对反应的影响.结果表明,以四氢呋喃为溶剂,CH_3OH为酰基受体,Lipase PLG脂肪酶为催化剂,Na_2CO_3为碱性添加剂,高底物浓度下40℃反应96h后,底物转化率和产物ee值分别达到49.5%和99.5%.碱的添加极大地提高了反应速度.

关键词: 脂肪酶 , 炔丙醇酮 , 炔丙醇酮乙酸酯 , 醇解 , 碱性添加剂

定向进化提高枯草芽孢杆菌脂肪酶的活力

赵博 , 陶进 , 马吉胜 , 廉虹 , 王岩 , 常琳 , 高仁钧 , 曹淑桂

催化学报

通过定向进化的方法, 提高了一个新的源于枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 的脂肪酶 (BSL2) 的活力. 经过两轮易错 PCR 以及高通量筛选, 最终获得了比活力为野生出发酶 4.5 倍的突变体 3-1B2. 基因比对结果表明, 共有两个氨基酸发生了突变. 突变酶的酶学性质研究发现, 与野生酶相比, 它的热稳定性及 pH 稳定性略有增加, 最适温度和最适 pH 值则无太大的变化. 同源模建了 BSL2 与 3-1B2 的结构, 并与底物进行了分子对接. 结果表明, 突变体 3-1B2 的结合能比野生型 BSL2 低 1.29 kcal/mol, 活性中心 Ser77 残基与底物羰基的距离也由 0.319 nm 减小为 0.278 nm, 因而加快了酶反应速度, 提高了酶活力.

关键词: 枯草芽孢杆菌 , 脂肪酶 , 易错聚合酶链反应 , 定向进化 , 分子对接

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