周艳卿
,
蒋小岗
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.04024
Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法，该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用，该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端，并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异硫氰酸苯酯是否可以修饰其他氨基酸侧链并影响多肽序列分析的研究。为了探究其修饰其他氨基酸的可能性，本文利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）研究了异硫氰酸苯酯对一个模型肽的化学修饰。质谱数据解析后发现在高浓度异硫氰酸苯酯的反应条件下，组氨酸上可以引入一个新的异硫氰酸苯酯修饰位点。这一修饰位点的发现预示着通过改变实验条件或分析方法，可以更准确地利用Edman降解和蛋白质组学技术分析多肽和蛋白质。
关键词:
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
,
液相色谱-串联质谱
,
Edman降解
,
异硫氰酸苯酯
,
模型肽
,
组氨酸
杨菁
,
孙黎光
,
白秀珍
,
周海涛
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2002.04.022
建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定18种氨基酸的方法.以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,用C18色谱柱在柱温38 ℃下采用二元梯度洗脱,于254 nm波长处检测.氨基酸质量浓度在 3.5 mg/L～55.6 mg/L时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度的线性相关系数,除胱氨酸(0.962)外均大于0.99;18种氨基酸的加标回收率在96.0%～102.4%.信噪比为2时,亮氨酸最低检测限为 0.5 mg/L.应用该方法对小牛血去蛋白注射液中的游离氨基酸含量进行了测定,取得了满意的结果.
关键词:
高效液相色谱法
,
柱前衍生化
,
异硫氰酸苯酯
,
正亮氨酸
,
氨基酸
王星
,
池玉梅
,
康安
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.08025
为建立中药材中氨基类极性非紫外活性成分的定性与定量分析方法，以中药材天南星为研究对象，采用柱前衍生化技术，以异硫氰酸苯酯（PITC）为衍生化试剂，经 C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，3.5μm）分离和超高效液相色谱-串联质谱（ UHPLC-MS／MS）分析，共解析了天南星中20个成分，包括18个氨基酸和2个胺类化合物。经优化衍生化条件，应用高效液相色谱法（HPLC），以 Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）分离，以乙腈和0.05 mol／L醋酸铵-醋酸缓冲液（ pH 6.5）为流动相，梯度洗脱，在254 nm 下检测，建立了同时测定15种氨基酸含量的方法，经方法学考察符合含量测定要求。谷氨酸、色氨酸在2~100 mg／L 范围内、精氨酸在6~300 mg／L 范围内、其余各氨基酸在0.8~40 mg／L范围内均呈良好的线性关系，相关系数均不小于0.9995；平均回收率在95％~105％之间，RSD均小于3％；并成功应用于12批中药材的测定。本方法简便、灵敏、准确，具有可操作性，可用于快速鉴定中药中的氨基类成分以及进行含量测定。
关键词:
柱前衍生化
,
超高效液相色谱-串联质谱法
,
高效液相色谱
,
氨基类成分
,
天南星
,
异硫氰酸苯酯
周艳卿
,
蒋小岗
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.04024
Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法，该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用，该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端，并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异硫氰酸苯酯是否可以修饰其他氨基酸侧链并影响多肽序列分析的研究。为了探究其修饰其他氨基酸的可能性，本文利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ MALDI-TOF-MS）和液相色谱-串联质谱（ LC-MS／MS）研究了异硫氰酸苯酯对一个模型肽的化学修饰。质谱数据解析后发现在高浓度异硫氰酸苯酯的反应条件下，组氨酸上可以引入一个新的异硫氰酸苯酯修饰位点。这一修饰位点的发现预示着通过改变实验条件或分析方法，可以更准确地利用 Edman降解和蛋白质组学技术分析多肽和蛋白质。
关键词:
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
,
液相色谱-串联质谱
,
Edman降解
,
异硫氰酸苯酯
,
模型肽
,
组氨酸
