张曼玉
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王春丽
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边阳阳
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程凯
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卫晓鸾
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叶明亮
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邹汉法
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00706
模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义.为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了用于筛选激酶底物模体的肽段文库.该肽段文库是大最非磷酸化肽段的混合物,将此混合肽段与酪蛋白激酶2和 三磷酸腺苷作用30 min后,通过固定化金属离子亲和色谱法富集磷酸化肽段,采用反相液相色谱-串联质谱分析,成功地鉴定到472条非冗余底物肽段,包含451个非冗余磷酸化位点,并山此得到底物模体S/T-D/E-x-D/E.该法能够快速准确地筛选出激酶底物模体,对研究激酶-底物识别以及信号转导过程具有重要意义.
关键词:
固定化金属离子亲和色谱
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反相液相色谱-串联质谱
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模体
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激酶
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肽段文库
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蛋白质组学
郭静
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晏嘉泽
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郭明
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靳艳
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.12032
基于鸟枪法蛋白质组学分析方法，使用反相液相色谱-串联质谱（RPLC-MS / MS）系统分析油菜蜂花粉蛋白质的胰蛋白酶酶解产物，结合数据库检索，共鉴定到353条肽段。鉴定到的肽段所归属的蛋白质中有239个蛋白质可检索到其分子生物学功能，主要功能为结合活性、酶活性、运输活性、抑制活性等。根据血管紧张素转化酶（ ACE）抑制肽活性与多肽构效之间的关系，从鉴定到的肽段中筛选并适当修饰后得到5条可能具有 ACE 抑制活性的肽段，化学合成肽段后进行了活性验证。结果表明5条肽段均具有良好的活性，其中肽段 AELDIVLALF 和 LAVN-LIPFP 表现出较高的 ACE 抑制活性，半数抑制浓度（ IC50）分别为（10.65±0.50）μmol / L 和（23.66±1.08）μmol / L。该方法速度快，成本低，大大缩短了鉴定周期，达到了高通量筛选生物活性肽的目的。
关键词:
反相液相色谱-串联质谱
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蛋白质
,
血管紧张素转化酶抑制肽
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油菜蜂花粉
