赵强
,
乐晓春
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.05.006
核酸适配体亲和色谱是将核酸适配体作为色谱固定相上的亲和配体的一种新型色谱技术.核酸适配体是一种可以特异性地识别目标物的寡聚核苷酸,与免疫抗体相比,核酸适配体在筛选制备、稳定性及应用等方面都显示出独特的优点.本文介绍了核酸适配体亲和色谱在小分子、蛋白质和细胞的分离和分析中的应用,对核酸适配体亲和色谱的研究现状和发展前景进行了综述.
关键词:
核酸适配体
,
亲和色谱
,
小分子物质
,
蛋白质
,
细胞
,
分离
,
检测
,
综述
魏琪
,
姚汝华
,
鲍时翔
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2000.04.022
以大孔纤维素滤纸为基质,通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化Cu2+,装柱后制得固定化金属螯合亲和膜色谱柱.对Cu/Zn-SOD粗品进行了纯化研究,将其比活从645 U/mL提高到6 882 U/mL,纯化倍数为10.7,蛋白回收率为92.3%,活性回收率达985%.设计了一种解决金属离子泄露问题的方案,将Cu2+泄露量降至86 μg/L.
关键词:
亲和色谱
,
亲和膜
,
固定化金属螯合亲和色谱
,
超氧化物歧化酶
叶明亮
,
邹汉法
,
刘震
,
雷政登
,
倪坚毅
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2000.06.013
提出了一种新的亲和色谱模式开管毛细管亲和液相色谱.在内径为50μm的毛细管内表面键合一层三嗪染料配体,利用毛细管电泳仪的压力系统进行亲和色谱实验.采用流动相切换洗脱技术,牛血清白蛋白和溶菌酶获得了有效的分离.连续运行10次,溶菌酶的出峰时间、峰面积和峰高的相对标准偏差分别为0.1%,4.3%,3.7%.在8.6ng～28.7ng范围内,溶菌酶的进样量与峰面积和峰高都呈线性关系,其相关系数分别为0.9946和0.9988.
关键词:
亲和色谱
,
开管柱
,
三嗪染料
,
溶菌酶
秦晓蓉
,
伍林
,
易德莲
,
胡雷
,
曹淑超
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.03.009
将纤维素滤纸进行碱处理及环氧活化、偶联亚氨基二乙酸、固定化铜离子等处理,并将其装入自制的色谱柱管,制得固定化铜离子亲和膜色谱柱.该柱可用于吸附血红蛋白(hemoglobin,Hb),吸附率可达到90% 以上.考察了上样量、pH值、温度、上样速度等因素对固定化铜离子亲和膜吸附Hb的影响.实验结果表明,固定化铜离子亲和膜色谱柱吸附血红蛋白的最佳条件为:室温下实验,缓冲体系的pH值控制在6～8,上样速度0.5～1.0 mL/min,上样量为3.16～7.90 mg/g.
关键词:
亲和膜
,
亲和色谱
,
固定化铜离子
,
血红蛋白
,
吸附
陈刚
,
白泉
,
耿信笃
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.05.001
通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(Con A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好.对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RNase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RNase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RNase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式.该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征.将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果.
关键词:
伴刀豆球蛋白
,
亲和色谱
,
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
,
糖蛋白
,
核糖核酸酶B
,
蛋白质组学
赵睿
,
刘国诠
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.02.004
亲和配基的选择与筛选是发展新的亲和色谱填料或构建一个新的亲和色谱体系所必须解决的首要问题.该文结合作者所在实验室的工作,对配基的选择、筛选与应用方面的一些进展进行了简要评述.作者所在实验室针对特定蛋白质和多肽的多肽亲和配基的筛选,开展了反义肽简并性的研究,发展了基于反义肽的组合化学筛选新方法.与常规的组合合成法相比,该方法简单、快捷、有效,极大地减小了合成和筛选的工作量,降低了筛选后亲和组分结构鉴定的难度.所建立的筛选策略已应用于流感病毒、严重急性呼吸道综合征(SARS)病毒亲和抑制剂的筛选和用于人β-干扰素测定的石英晶体微天平(QCM)生物传感器的构建,均取得了有意义的结果.
关键词:
亲和色谱
,
配基
,
筛选
,
应用
陈义烘
,
黄慧敏
,
李任强
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.03.009
环节动物的S型凝集素在结构和生化性质上都有别于一般的S型凝集素,其在抗癌等研究方面的潜在价值重大.根据环节动物S型凝集素的性质,采用惰性分子筛填料Sepharose CL-6B(琼脂糖凝胶CL-6B)作为亲和色谱介质对蚯蚓S型凝集素进行了纯化.以2 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)-MEPBS(4 mmol/L β-巯基乙醇,150mmol/L NaCl,20 mmol/L磷酸盐,pH 7.2)溶液作为平衡液,以氨水(150 mmol/L,pH 10.5)作为洗脱液得到的蛋白质经SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)、凝血实验及荧光检测等证明了其即为蚯蚓S型凝集素.该方法只需一个步骤即可从蚯蚓提取液中分离到纯的S型凝集素,比传统方法更加快捷高效,优越性明显.该方法的应用将有利于对环节动物S型凝集素的深入研究.
关键词:
琼脂糖凝胶CL-6B
,
亲和色谱
,
一步纯化
,
S型凝集素
,
蚯蚓
王雄飞
,
张玉杰
,
叶静
,
罗志强
,
詹雪艳
,
袁瑞娟
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.01024
对凝血酶-琼脂糖亲和色谱介质的制备方法进行了研究.首先使用凝血酶和溴化氰活化的琼脂糖制备凝血酶-琼脂糖亲和色谱介质,然后用生色底物法考察亲和色谱介质上凝血酶的活性,以凝血酶活性为指标对最佳偶联条件进行了优化.结果表明最佳条件为使用pH8.3的Na2CO,-NaHCO,溶液(含0.5 mol/L NaCl)为缓冲溶液,凝血酶用量为每1 g色谱介质加入凝血酶200 U,室温反应10 h.在最佳条件下所制备的色谱介质有较好的稳定性,在4℃条件下存放40天,亲和介质上的凝血酶活性仍有70.6％保留.该亲和色谱介质可广泛用于含凝血酶抑制剂的天然药物筛选和分离纯化.
关键词:
凝血酶
,
亲和色谱
,
生色底物法
