李克
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商学军
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陈永刚
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.04.030
采用高效液相色谱法测定精浆中过氧化脂质(lipid peroxidation,LPO)含量,研究了有正常生育能力的男子和不育症患者精浆中LPO含量水平差异及其对男子不育症的影响.精浆样品经酸化后,分解生成的丙二醛(malondialdehyde,MDA)与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)缩合反应形成紫红色产物,以Lichrospher C18化学键合硅胶为固定相,0.025 mol/L KH2PO4 (pH 6.2)-甲醇(体积比为58∶42)为流动相进行色谱等度分离,在532 nm波长下检测,并对各组测定结果进行统计学分析.在所建立的分析条件下,MDA-TBA缩合物的色谱保留时间约为4 min,峰形清晰对称,与样品中其余内源性物质分离完全,定量准确.MDA浓度在0.10～2.50 μmol/L内与峰面积之间的线性良好.MDA峰面积批间(n=5)、批内(n=7)测定的相对标准偏差分别为3.8%和3.1%,样品测定回收率为90.0%～98.8%.方法已应用于因脂质过氧化反应过高所致男性不育症的研究.除阻塞性无精子症组外,其余各不育组与正常生育组相比,精浆中MDA水平均有显著性差异(P<0.01).
关键词:
高效液相色谱法
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脂质过氧化
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丙二醛
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精浆
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不育症
