高培峰
,
赵新颖
,
贺木易
,
刘庆生
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03059
利用一步法和两步法毛细管等电聚焦(clEF)方法分离测定了蛋白质和多肽的等电点(pI).讨论了两步法等电聚焦过程所需的溶液组成、样品进样体积、聚焦电压、聚焦时间和分离条件等因素对分离效果的影响.并对一步法和两步法进行了比较.对细胞色素C、血红蛋白、肌红蛋白、转铁蛋白和牛血清白蛋白以及6种多肽的分析结果表明:一步法步骤简单,分离速度快,可测定单一组分的pI,也能快速分离混合蛋白和多肽,但分离度较差,且不能同时准确测定各组分的pI;两步法步骤复杂,分析时间较长,但能够同时分离并准确测定混合样品中各组分的pI,所测的pI值与单一组分进行测定的结果基本一致.两种方法可相互结合、互为补充,可广泛应用于两性生物微粒等电点的快速和准确测定.
关键词:
毛细管等电聚焦
,
一步法
,
两步法
,
蛋白质
,
多肽
汪勇
,
高培峰
,
赵新颖
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03052
建立了毛细管电泳表征多肽和糖蛋白稳定性的方法.分别以血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和植物血球凝集素(PHA)、牛凝血酶(B-Thr)、人凝血酶(H-Thr)、辣根过氧化物酶(HRP)4种糖蛋白为多肽和糖蛋白的模式分子.从样品浓度、电泳缓冲液、样品溶液pH和离子强度等方面优化了血管紧张素Ⅱ的分离分析条件;从毛细管的选择、样品的电荷状态、电泳缓冲液的选择和分离电压的影响等方面讨论了糖蛋白的分离条件.Ang Ⅱ和4种糖蛋白的稳定性试验结果表明:Ang Ⅱ可在pH 7.4的硼酸盐缓冲液(0.02 mol/L)中于4℃下稳定放置48 h;4种糖蛋白可在pH 7.4硼酸盐缓冲液(0.2 mol/L)中于20,4,-20℃下稳定放置48 h;放置时间大于一周且小于四周时,在-20℃下各蛋白质均保持稳定;放置时间大于两周且小于四周时,只有HRP在上述3个温度下均保持稳定.该方法具有高效、快速、简单、低成本的特点,可广泛应用于多肽和蛋白质的稳定性表征.
关键词:
毛细管电泳
,
多肽
,
糖蛋白
,
稳定性
