陈天豹
,
邓文汉
,
卢菀华
,
陈儒明
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2001.01.023
用毛细管电泳法对5种常用的抗生素四环素(TC),土霉素(OTC),多西环素(DOC),金霉素(CTC)和氯霉素(CP)进行了分离。研究了电泳缓冲液的pH、不同有机试剂添加剂、温度等因素对抗生素分离的影响。实验结果表明，体积分数为4%的N-甲基吗啡啉的加入可大大改善分离效果。在各自相应的浓度范围内，峰面积和样品浓度之间呈现良好的线性关系，重现性好。氯霉素的检测极限为10μg/L,四环素、土霉素、多西环素为20μg/L，金霉素为40μg/L(信噪比>5)。该方法成功地应用于蜂蜜中残留抗生素的测定，具有操作简单、快速方便、灵敏度及自动化程度高、重现性好等优点，是对含抗生素类物质进行痕量分析的好方法。
关键词:
毛细管电泳
,
抗生素
,
蜂蜜
,
痕量分析
时祥柱
,
郭春腾
,
周建武
,
王中来
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2002.04.005
以普通定性滤纸为底物,经碱处理后,研究其对纤维素酶的亲和吸附作用.结果表明,普通定性滤纸对纤维素酶具有比较强的特异性吸附作用,能够从粗酶液中分离出纤维素酶,再经POROS 20HQ阴离子交换柱纯化后即可得到电泳纯的纤维素酶.该法大大简化了传统的纤维素酶纯化工艺,所得的纤维素酶活力极高,比活达350 U/mg以上,滤纸一步吸附后纤维素酶的纯化倍数为9.55,活性回收率在10%左右.纯化后的纤维素酶为内切β-葡聚糖酶,相对分子质量为60000,最佳pH为4.0,最佳温度为70 ℃.
关键词:
纤维素酶
,
滤纸
,
纯化
,
亲和
陈萍
,
李仁宽
,
徐小华
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2002.05.014
建立了快速分离和检测引起仔猪腹泻的肠毒性大肠杆菌K88、K99和987P细菌细胞的毛细管区带电泳方法,并进行了腹泻仔猪粪便中肠毒性大肠杆菌的应用检测分析.结果表明,在电泳缓冲液为0.05 mol/L Na2CO3-NaHCO3(pH 9.9)、分离电压为14.1 kV、检测波长为210 nm的电泳条件下,E.coli K88、K99和987P的细胞分别具有单一、稳定的特征谱峰,其保留时间的相对标准偏差RSD≤0.9%;在确定的实验条件下,实现了腹泻仔猪粪便中肠毒性大肠杆菌的快速检测分析,发现将出生5 d～6 d的腹泻仔猪粪便引入培养基中增殖后主要检出K88,将出生30 d～35 d的腹泻仔猪粪便引入培养基中增殖后主要检出K99,将出生60 d左右的腹泻仔猪粪便引入培养基中增殖后未发现肠毒性大肠杆菌.
关键词:
毛细管区带电泳
,
分离
,
检测
,
肠毒性大肠杆菌
,
腹泻仔猪粪便
陈昭华
,
刘树滔
,
薛伟明
,
赖伟苹
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.03.011
建立了高效离子交换色谱和激光光散射仪联用的分离-检测系统研究对数期金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的方法.实验采用TSKgel SuperQ-TOYOPEARL 650C色谱柱,以20 mmol/L的哌嗪-盐酸缓冲液(pH 6.0)为流动相,倍增系数为21的光散射系统检测,发现对数期的S.aureus表现出两个有规律变化的色谱峰.透射电镜观察显示前峰的S.aureus为圆形,后峰为椭圆形且有一条明显的横隔壁.采用3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-苯基溴化四氮唑盐(MTT)试剂测定这两个色谱峰,发现后峰的增殖能力比前峰高65.3%.实验结果表明,前峰为停止分裂的金黄色葡萄球菌、后峰为处于裂殖状态的金黄色葡萄球菌.该方法可作为研究微生物的一种快速而精确的新型分析方法.
关键词:
高效离子交换色谱
,
金黄色葡萄球菌
,
对数期
王宾香
,
时祥柱
,
郭春腾
,
叶秀云
,
王中来
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.05.018
将阴阳离子交换色谱柱在灌注色谱工作站上串联,使苦瓜籽粗提液中未被阴离子色谱柱吸附的蛋白质直接在阳离子色谱柱上吸附,用盐线性梯度洗脱从阳离子色谱柱上分离出两个具有抗真菌活性的蛋白.两个抗真菌蛋白经鉴定都达到了电泳纯,相对分子质量均为30 000左右,N-端氨基酸序列分别为DVSFRLSGADPRSYGMFI与DVNFDLSTATAK,表明所得到的两种蛋白为苦瓜籽中的2个Ⅰ型核糖体失活蛋白α-苦瓜素(α-MMC) 和β-苦瓜素(β-MMC).抗菌实验表明,α-MMC对香蕉枯萎菌和果腐霉菌均具有较强的抑制作用,β-MMC对果腐霉菌有较强的抑制作用,而α-MMC和β-MMC对白绢菌的抑制活性均不明显.采用串联色谱,α-MMC和β-MMC的质量回收率分别为13.8%和8.0%.
关键词:
阴离子交换色谱
,
阳离子交换色谱
,
串联色谱
,
苦瓜籽
,
纯化
,
核糖体失活蛋白
张洋
,
温腾
,
林娟
,
谢智
,
刘树滔
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.04.021
采用离子交换色谱法对世界上分布最广、危害最重且最难防治的植物致病菌青枯菌进行了色谱表征.在以0.02 mol/L哌嗪-盐酸缓冲液(pH 8.0)为流动相、梯度洗脱条件下,青枯菌在SuperQ-650 C色谱柱(200 mm×4.6 mm i.d.)上被分离为3个不同的色谱峰.根据这3个组分的形态和生理生化性质,确定青枯菌原液和分离得到的3个组分都属于青枯菌的生化型Ⅲ型.通过2,3,4-三苯基氯化四氮唑(TTC)平板鉴定两个洗脱峰菌体的致病性及电镜观察二者的运动性,发现第一洗脱峰菌体的致病性弱于第二洗脱峰菌体而运动性强于后者.实验表明,通过离子交换色谱可以把常规微生物方法无法分离的青枯菌的不同状态区分出来.分离结果将为阐明青枯菌的多态性及传代培养过程中致病性逐渐减弱的内在机理,最终研制出特效的青枯菌抗菌剂具有重要意义.
关键词:
离子交换色谱
,
青枯菌
,
生化鉴定
,
多态性
林娟
,
马骋
,
刘树滔
,
吴玲玲
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.01.014
应用高效离子交换色谱和激光光散射仪在线检测,快速分离定量不同致病力的青枯菌.青枯菌经过高效离子交换色谱分离得到3个特征峰,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)平板鉴定和采用剪叶法回接番茄组培苗感染试验,发现这3个色谱峰所对应的青枯菌在致病力方面存在差异;其中峰3组分的致病力最强,峰1组分的致病力最弱.通过对青枯菌进样量与激光光散射仪的响应信号(峰面积)之间的线性关系研究,发现当青枯菌进样菌数为9×106～9×108时,菌数与色谱峰面积之间呈现出良好的线性关系,相关系数r=0.99.该项应用研究为不同致病力青枯菌的快速定量提供了一种新的分析方法.
关键词:
高效离子交换色谱
,
激光光散射仪
,
青枯菌
,
致病力
,
分离
,
定量
