金东日
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马奎蓉
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张小勇
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吴信子
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崔胜云
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朱玉兰
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丰冈利正
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2002.04.004
以R-(-)/S-(+)-4-(N,N-dimethylaminosulfonyl)-7-(3-iso-thiocyanatopyrrolidino)-2,1,3-benzoxadiazole (DBD-PyNCS)为手性荧光衍生化试剂,用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对DL-肾上腺素对映体进行分离.衍生化反应是在含有7%吡啶的溶剂中,65 ℃温度条件下反应35 min,生成具有荧光特性的肾上腺素非对映体衍生物(λex=460 nm, λem=550 nm).生成的非对映体衍生物在流动相为乙腈-水(体积比为28∶72),流速为1.0 mL/min时,在DiamonsilTMC18色谱柱(150 mm×4.6 mm i.d.,5 μm)上分离度可达2.6.肾上腺素对映体在0.07 g/L～0.50 g/L时与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9995),峰面积测定结果的相对标准偏差为4.3%(n=7),最低检测限为12 ng/L(S/N=3).
关键词:
手性荧光衍生化试剂
,
反相高效液相色谱法
,
肾上腺素对映体
贾绍栋
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张美娜
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金东日
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.05.007
以R(-)-4-N,N-二甲基磺酰胺-7-(3-异氰酸吡咯烷)-2,1,3-苯并氧杂咪唑(R(-)-DBD-PyNCS)为手性荧光衍生化试剂,成功地拆分了甲状腺素对映体D,L-四碘甲状腺原氨酸(T4)和L-三碘甲状腺原氨酸(T3).在反应温度为40℃、反应时间为20 min时,R(-)-DBD-PyNCS在碱性介质中可与甲状腺素对映体生成稳定的非对映体衍生物.该衍生物在以乙腈-水-醋酸(体积比为60:40:1)为流动相,流速为1.0 mL/min,色谱柱为Intersil@-ODS-3 C18柱(150 inm×4.6 ml,5μm)的色谱条件下得到了充分的分离.采用荧光检测器在激发波长460 nm、发射波长550 nm下检测.D,L-T4和L-T3分别在0.016～0.30μg/μL和0.006 7～0.22μg/μL范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系(r>0.999).D,L-T4和L-T3)的最低检出限分别为0.02 μg/mL和0.85μg/mL(S/N=3).在D-T4、L-T4、L-T3质量浓度分别为0.10μg/μL下测得峰面积的相对标准偏差分别为3.40%,1.63%,3.30%(n=7).该方法成功地应用于甲状腺片中T4和T3的含量测定.
关键词:
高效液相色谱
,
荧光检测
,
柱前衍生化
,
荧光衍生化试剂
,
手性拆分
,
甲状腺素对映体
