白海红
,
范超
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沈丙权
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田芳
,
邓玉林
,
潘一廷
,
秦伟捷
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.11022
蛋白质的 N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关，是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质，且糖链结构具有高度微不均一性，这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引发-原子转移自由基聚合（ SI-ATRP ）法，以带有双键的氨基葡萄糖为单体（GMAG），成功制备了新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料（pGMAG-SiO2）。由于在硅胶表面引入致密的亲水聚合物层，该填料不仅保持了硅胶良好的机械强度，而且显著提高了其亲水性，因此非常适合作为亲水填料用于蛋白质的N-糖链富集。以麦芽七糖和鸡卵清蛋白的N-糖链为研究对象，考察了该填料对N-糖链的富集效果，并将该杂化填料成功用于人血浆中糖蛋白 N-糖链的富集检测，共鉴定了47种糖型。以上结果表明，pGMAG-SiO2填料对N-糖链具有较高的亲和性，可以用于 N-糖链的高覆盖率鉴定。
关键词:
表面引发-原子转移自由基聚合反应
,
核壳型硅胶填料
,
N-糖链
,
N-糖基化蛋白质
时照梅
,
范超
,
黄俊杰
,
白海红
,
秦伟捷
,
蔡耘
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.09037
生物体内蛋白质的糖基化修饰调控着细胞识别、细胞黏附和迁移以及免疫应答等多种生理过程,并与多种人类重大疾病的发生、发展密切相关.因此对蛋白质糖基化修饰的鉴定,不仅能够为生物学机理研究提供重要信息,对疾病诊断标志物和治疗靶标的发现也至关重要.然而在复杂生物体系中,大多数糖蛋白为低丰度蛋白质,其含量与现有质谱仪器的检测灵敏度之间存在较大差距,所以对含有不同糖型结构的糖蛋白进行全面/高效的富集,是实现高灵敏度糖蛋白鉴定的必由之路.凝集素富集作为一种有效的糖蛋白富集方法,已在糖蛋白质组学研究中得到了广泛的应用.针对现有凝集素功能化材料存在负载量偏低以及富集效率有限等问题,我们制备了两种以氧化石墨烯(GO)为载体的新型固定化凝集素,利用GO比表面积大,功能基团含量高,分散性、化学稳定性好等特点,实现了高负载量的凝集素固定(GO-ConA 2.073 mg/mg,RSD=1.0％;GO-WGA 1.908 mg/mg,RSD=0.14％).同时考察了材料的可重复使用性与稳定性:每隔3天测一次同一GO-lectin材料对对应糖蛋白的富集效果,可以看出材料合成两周内富集效果都＞200 μg/mg.将该GO-lectin成功应用于糖蛋白、糖肽的选择性富集,在糖蛋白质组学研究中体现出良好的应用潜力.
关键词:
凝集素
,
氧化石墨烯
,
富集
,
糖蛋白
,
糖肽
潘一廷
,
马成
,
白海红
,
张养军
,
秦伟捷
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03055
为了增加开管毛细管柱(OTCC)的相比,提高分离效率,发展了表面引发原子转移自由基聚合法(SI-ATRP)制备葡萄糖聚合物修饰的开管毛细管柱.通过扫描电镜观察,该开管柱内壁上修饰了三维波浪状聚合物,明显增加了内壁比表面积和相比.在pH 3 ～11范围内,对含糖聚合物修饰的开管柱和空柱的电渗流进行了比较.修饰后开管柱的电渗流仅为空柱的1/2 ～ 1/3,且在pH6 ～11范围内保持平稳.稳定的电渗流保证了分离的重复性和稳定性.用该开管毛细管柱成功实现了小分子混合物(苯丙氨酸、胸腺嘧啶、腺苷、鸟苷、5-溴尿嘧啶、水杨酸)以及蛋白质大分子(核糖核酸酶B、转铁蛋白和牛血清白蛋白)的有效分离,结果表明葡萄糖聚合物修饰的开管毛细管柱具有良好的重复性和稳定性.
关键词:
表面原子转移自由基聚合
,
毛细管电色谱
,
开管毛细管柱
,
糖聚合物
