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毛白杨环氧水解酶的异源表达及其在催化拆分手性环氧化物中的应用

赵晶 , 鞠鑫 , 潘江 , 李春秀 , 王敏杰 , 许建和

催化学报 doi:10.3724/SP.J.1088.2012.10832

对已公布的全基因组进行检索发现,杨树(Populus tomentosa)至少含有24个预测为可溶性环氧水解酶的基因.从中选取了7个可能的环氧水解酶基因进行克隆,通过扩增得到其中5个毛白杨(Populus tomentosa Carr)环氧水解酶基因.序列分析显示,它们与已克隆的巨大芽胞杆菌环氧水解酶的同源性仅为24%~26%.对该系列基因进行了在E.coli中的异源表达,并将得到的5个环氧水解酶(PTEH 1~5)用于缩水甘油苯基醚和对硝基苯乙烯氧化物的酶促水解反应.结果发现,其中3个重组酶具有显著的环氧水解酶活性.进一步研究表明,PTEH1和PTEH2对于缩水甘油苯基醚显示了一定的反常规的(R)-选择性,而PTEH5则优先水解(S)-构型的缩水甘油苯基醚.因此,毛白杨中环氧水解酶表现出多样性.

关键词: 毛白杨 , 环氧水解酶 , 异源表达 , 缩水甘油苯基醚 , 对硝基苯乙烯氧化物 , 催化拆分

应用机器人自动铺丝技术成型卫星反射器面板

董晓阳 , 刘永佼 , 潘江 , 郭金海 , 左龙彦

宇航材料工艺 doi:10.3969/j.issn.1007-2330.2016.06.007

采用自动铺丝技术成型卫星反射器面板,通过机器人平台进行自动铺丝试验.根据反射器面板抛物线方程特性,采用等距偏移方法规划铺丝轨迹;通过分析自动铺放过程中铺放压力、铺放覆盖完整性以及铺放平整性对轨迹规划的要求,确定铺放压力为0.2 MPa、铺放丝束为4丝束.同时对机器人连杆机构及参数进行分析,基于CATIA软件DMU模块对铺丝轨迹进行仿真,并在26℃、16 mm/s铺放速度下通过自动铺放试验验证了反射器面板自动铺丝工艺成型的可行性.

关键词: 复合材料 , 反射器 , 铺丝 , 机器人

内酯酶产生菌的筛选及其催化拆分手性内酯的性能

张仙 , 潘江 , 许建和

催化学报

以γ-丁内酯系列化合物作为唯一碳源,通过富集培养从土壤中分离得到180株产内酯酶的菌株.经反复筛选,从中挑选出两株内酯水解活性和选择性均较高的菌株.经鉴定,这两株真菌皆为镰孢霉菌属,分别命名为Fusarium moniliformeECU2001和Fusarium prollyeratum ECU2002.对这两株菌的产酶特性进行了研究,发现ECU2001的内酯酶属于胞内酶,而ECU2002的内酯酶同时存在于胞内和胞外.选择戊二醛交联的方法对这两株菌进行了细胞固定化,结果表明,ECU2002固定化细胞的活力、选择性和稳定性都优于ECU2001.ECU2002固定化细胞反应的适宜温度和pH分别为50℃和7.0~7.5.考察了ECU2002固定化细胞的底物专一性,发现底物为α-羟基-γ-丁内酯时,固定化细胞的活性最高,其催化速率是γ-丁内酯的54.3倍.利用ECU2002固定化细胞催化α-羟基-γ-丁内酯的对映选择性水解,固定化细胞重复使用10批后活力仍保持为初始活力的92.8%,水解产物经内酯化后得到(R)-α-羟基-γ-丁内酯的光学纯度为92.8%~96.1%ee.

关键词: 内酯酶 , 串珠镰孢菌ECU2001 , 层出镰孢菌ECU2002 , 固定化细胞 , α-羟基-γ-丁内酯

粘质沙雷氏菌脂肪酶的固定化及催化拆分反式3-(4'-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯

龙章德 , 许建和 , 潘江

催化学报

对粘质沙雷氏菌脂肪酶进行了固定化研究,确定硅藻土和环氧树脂Eupergit C是较好的固定化载体. 固定化后酶的热稳定性、 pH稳定性及储存稳定性均明显提高. 以Eupergit C共价固定的脂肪酶,其操作稳定性比硅藻土吸附酶好,重复使用10批次后,剩余酶活力还有50%左右,戊二醛交联对Eupergit C固定化酶稳定性的提高没有明显效果,而硅藻土吸附酶经戊二醛交联后稳定性有所提高,经5批次反应后剩余酶活力还有50%. 使用交联后的硅藻土固定化酶(1 g, 200 U), 在两相搅拌反应器(工作体积200 ml, 甲苯∶水体积比=1)中对地尔硫卓手性前体(±)-反式3-(4'-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯((±)-MPGM)(有机相浓度为0.5 mol/L)进行了催化拆分,经5批次反应后,共得纯(2R,3S)-(-)-MPGM 18.6 g, 产品光学纯度(对映体过量)>99%, 总收率为37.2%.

关键词: 粘质沙雷氏菌 , 脂肪酶 , 固定化 , 对映选择性水解 , 反式3-(4'-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯 , 硅藻土 , 环氧树脂 , Eupergit C

绿豆环氧水解酶催化对硝基苯乙烯氧化物的对映归一性水解

鞠鑫 , 潘江 , 许建和

催化学报

利用绿豆环氧水解酶催化(R,S)-对硝基苯乙烯氧化物水解,产物(R)-对硝基苯乙二醇的产率超过常规酶促拆分的极限产率(50%), 表明发生了对映体会聚. 采用绿豆粉剂和粗酶制剂考察了不同条件下的生物催化反应,结果表明,添加吐温-80 作为分散剂对反应有促进作用. 对该酶的固定化进行了初步研究,发现酶经硅藻土吸附固定化后稳定性显著增加. 在克级规模制备实验中,产物的总产率达73.3%;产物经一步重结晶,得到了光学纯度大于99%的(R)-对硝基苯乙二醇.

关键词: 绿豆 , 环氧水解酶 , 对硝基苯乙烯氧化物 , 对映归一性水解 , (R)-对硝基苯乙二醇

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