高明霞
,
关霞
,
洪广峰
,
张祥民
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.05.005
蛋白质组学出现之后,多维高效液相色谱(multidimensional HPLC,MD-HPLC)系统以其快速、高效、自动化程度高以及容易与质谱等其他技术联用等优势而成为蛋白质组学相关分析技术中研究应用的热点.本文主要以本实验室在蛋白质组学研究中的技术进展为主线,介绍了多维高效液相色谱技术的发展,包括经典的"bottom-up"技术和"top-down"式的多维高效液相色谱技术路线,以及为了提高系统的分离通量而自行设计搭建的阵列式多维高效液相色谱平台,这些技术路线在蛋白质组学研究中有着极大的潜在应用价值.
关键词:
多维液相色谱
,
bottom-up
,
top-down
,
阵列式
,
完整蛋白质
,
蛋白质分离
洪广峰
,
高明霞
,
晏国全
,
关霞
,
陶芊
,
张祥民
色谱
为了构建高效的离子交换/反相二维液相色谱(IEC/RPLC)分离平台系统,提高复杂蛋白质样品的分离效率,对色谱柱进行了评价与筛选.通过对实际人肝蛋白质样品的分离效果的比较,选择确定了TSKgel DEAE-5PW弱阴离子交换色谱柱(WAX)作为第一维色谱分离柱;考察了同一规格的10支代表性反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm,30 nm,C4、C8或C18),通过评价其对尿嘧啶、硝基苯、萘和芴的分离性能以及对3种标准蛋白质样品的非特异性吸附、对人肝蛋白质样品的WAX馏分的分离效果,最终确定以Jupiter 300 C4反相色谱柱作为第二维色谱分离柱.对两维色谱柱的选择优化为蛋白质高效分离二维液相色谱平台的搭建提供了可靠基础.
关键词:
蛋白质组学
,
多维液相色谱
,
蛋白质
,
Top-down技术
黄志
,
洪广峰
,
高明霞
,
张祥民
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.10020
构建了一种在线阵列式二维常规柱液相色谱系统，并将其应用于分离血浆中的完整蛋白质。该系统以1根强阴离子交换柱作为第一维分离柱，8根阵列式反相色谱柱作为第二维分离柱。强阴离子交换柱分离的馏分通过十通阀被依次转移到第二维预柱上并得到保留富集，随后第二维流动相通过分流器同时将预柱上的蛋白质反冲至分析柱上进行分离。二维之间以及第二维阵列色谱柱之间均相互独立，从而可以提高系统分离的通量和总峰容量。采用该系统对血浆中的蛋白质进行了完整蛋白质水平上的分离。该系统具有高通量和高分辨率的特点，为血浆样品中高丰度蛋白质的去除以及血浆样品的深入研究提供了一种有效的手段。
关键词:
阵列二维色谱
,
在线
,
蛋白质
,
血浆
,
蛋白质组学
