郅文波
,
邓秋云
,
宋江楠
,
顾铭
,
欧阳藩
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.01.003
利用多分离柱高速逆流色谱仪,研究了聚乙二醇1000(PEG1000)-磷酸盐双水相体系的固定相保留率及该体系对蛋白质混合物和鸡蛋清样品的分离.以14.0%PEG1000-16.0%磷酸盐体系的上相为固定相,在流速0.6mL/min和转速900 r/min的条件下,固定相的保留率达到33.3%.在pH 9.2的PEG1000-磷酸盐双水相体系中,细胞色素C、溶菌酶和血红蛋白的分配系数差异最大,采用该pH值的14.0%PEG1000-16.0%磷酸钾盐双水相体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了这3种蛋白质的混合物.鸡蛋清中的主要蛋白质成分--卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶在pH 9.2的15.0%PEG1000-17.0%磷酸钾盐体系中也具有最大的分配系数差异.采用该体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了鸡蛋清样品,得到的卵白蛋白、溶菌酶和卵转铁蛋白的电泳纯度分别为100%,100%和60%,收率均大于90%.
关键词:
高速逆流色谱
,
双水相体系
,
蛋白质
,
分离纯化
张建东
,
苏志国
,
欧阳藩
膜科学与技术
doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2001.05.011
蛋白质对膜的污染是限制微滤效率的关键因素之一.迄今为止虽然已就膜污染的机理进行了广泛研究,但是,还没有一种比较完善的方法直接对污染的微滤膜上的蛋白质进行定量.文章建立了一种简便的测定微滤膜上污染的蛋白质量的方法.被蛋白污染的膜首先用氨基黑10B染色,再在脱色液中脱色,最后用洗脱液洗脱结合到膜上的染料.在620*!nm处测定洗脱液的吸光度.根据吸光度计算膜上蛋白的量.并就3种膜(纤维素膜,Druapore GVWP膜和核孔膜)和4种蛋白质(牛血清白蛋白,牛血红蛋白,溶菌酶和卵清蛋白)进行实验,测定了点样、堆积和吸附3种条件下洗脱液吸光度和膜上蛋白量的关系,均呈较好线性.但不同蛋白质之间存在一定差异.
关键词:
膜污染
,
蛋白质定量
,
微滤
