曹冬梅
,
许杨
,
涂追
,
李燕萍
,
熊亮
,
付金衡
分析化学
doi:10.11895/j.issn.0253-3820.150902
从噬菌体展示的抗黄曲霉毒素B1(AFB1)纳米抗体文库中,通过四轮亲和淘选,得到抗AFB1纳米抗体G8。将编码纳米抗体G8的基因与碱性磷酸酶(AP)基因融合,构建了重组融合表达载体pET25b(+)-G8-AP,将其转化大肠杆菌BL21(Rosetta,DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导融合基因表达。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白G8-AP为可溶性表达,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,对硝基苯磷酸二钠(pNPP)法测得纯化后的G8-AP的碱性磷酸酶比活力为(364.5±8.3) U/mg。ELISA检测结果表明,G8-AP具有特异识别AFB1的活性,与其它真菌毒素(AFB2、AFG1、AFG2、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马菌素B1)无交叉反应。基于G8-AP建立了检测AFB1的一步ELISA法。在优化的条件下,即甲醇浓度20%、盐离子浓度20 mmol/L、pH 7.4条件下,方法的半数抑制浓度(IC50)为19.8 ng/mL,线性范围为4.3-92 ng/mL,检出限为2.6 ng/mL。对玉米和小麦样品加标回收实验结果表明,基质对本方法的干扰不明显,可用于实际样品检测。
关键词:
抗黄曲霉毒素B1纳米抗体
,
碱性磷酸酶
,
融合表达
,
酶联免疫吸附分析
张万权
,
李燕萍
,
刘晨江
,
王吉德
,
糟新民
应用化学
doi:10.3969/j.issn.1000-0518.2009.01.013
分别使用微波辐射法和常规加热回流方法,采用活性基团亚结构连接法,由1-肼羰亚甲基-2-三氟甲基苯并咪唑与芳酰基异硫氰酸酯(1a～1k)反应,合成了一系列未见文献报道的1-(2-三氟甲基苯并咪唑-1-乙酰基)-4-芳酰基氨基硫脲(2a～2k). 与常规法相比,微波辐射法反应过程简单、反应时间较短、产率较高、副反应少、产物易纯化. 其结构由元素分析、IR、1H NMR分析得到确证. 生物活性初步实验结果表明,在初始质量浓度为200 mg/L条件下,只有化合物2a稍具抗HIV-1逆转录酶活性.
关键词:
微波辐射
,
苯并咪唑
,
芳酰基氨基硫脲
,
合成
孙文理
,
李燕萍
,
刘晨江
,
李海龙
应用化学
doi:10.3969/j.issn.1000-0518.2009.08.004
以2-苯基-1,2,3-三唑-4-甲酸、氨基硫脲为原料在三氯氧磷中反应得到2-氨基-5-(2-苯基-1,2,3-三唑-4-基)-1,3,4-噻二唑,然后分别采用超声辐射法和常规加热法与芳酰基异硫氰酸酯反应合成了一系列的N-[5-(2-苯基-1,2,3-三唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基]-N′-酰基硫脲.通过与常规方法比较,采用超声辐射法反应时间只有原来的12.5%,反应产率提高了4%～17%,减少了副反应.所有化合物的结构经元素分析、MS、IR、1H NMR测试技术确证.
关键词:
超声波辐射
,
芳酰基硫脲
,
噻二唑
,
苯接三唑
张良
,
许杨
,
李燕萍
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00393
建立了测定红曲米中莫纳可林K含量的胶束电动毛细管色谱(MEKC)方法.考察了运行缓冲液的种类、pH及其浓度、有机添加剂、十二烷基硫酸钠(SDS)的浓度和分离电压等实验条件对电泳分离效果及检测灵敏度的影响.在优化的实验条件下,以20 mmol/L 硼砂(pH 10.6,含10%(体积分数)乙醇和40 mmol/L SDS)作为缓冲溶液,莫纳可林K能在23 min内实现很好的基线分离,线性范围为5.00～100.00 mg/L,线性相关系数为 0.9976,检出限(以信噪比(S/N)为3计)为0.13 mg/L,加标回收率为98.5% ～99.5%.精密度和稳定性试验中,峰面积和迁移时间的相对标准偏差均小于3%,表明重复性良好.该方法简便、快速、灵敏,可用于红曲米中莫纳可林K含量的测定.
关键词:
胶束电动毛细管色谱
,
莫纳可林K
,
红曲米
