刘佳
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张庆林
,
毕建进
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王晓娜
,
龚萍
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哈小琴
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王正平
,
吴祖泽
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.01.019
采用阴离子交换高效液相色谱法监测重组质粒pUDKH的生产过程和该质粒产物中超螺旋pUDKH的比例.所用的色谱条件为:色谱柱TSK gel DNA-NPR (4.6 mm i.d.×75 mm);流动相体系由20 mmol/L Tris-HCl(pH 8.8)和1 mol/L NaCl组成,梯度洗脱方式.分析结果表明:质粒产物中超螺旋pUDKH含量达95%(质量分数)以上时,检测不到残留的核糖核酸(RNA).高效液相色谱法检测质粒pUDKH产物及其生产过程的灵敏度高、试样用量少,分辨率高.
关键词:
高效液相色谱
,
重组质粒pUDKH
,
超螺旋
宋子凤
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张庆林
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张养军
,
秦伟捷
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钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.02006
利用原子转移自由基聚合法制备了鳞片状聚合物修饰的硅胶填料,将其作为一种新型的固定化酶载体,实现了蛋白酶的高密度固定,从而明显缩短了复杂蛋白质样品的酶解时间.使用标准蛋白质对固定化酶的酶解效率进行了考察,结果表明:鳞片状聚合物修饰的新型固定化酶硅胶填料具有较高的酶解效率,酶解标准蛋白质1 min 后,鉴定到肽段的氨基酸序列覆盖率可达95％以上.将该固定化酶硅胶填料成功应用于大肠杆菌全蛋白质的酶解,从2 min酶解肽段的混合物中鉴定到的蛋白质数量超过同样条件下溶液酶解12h的结果.另外,该固定化酶硅胶填料可以重复使用,其酶解效率具有良好的稳定性和重现性；该固定化酶具有较好的样品回收率,因而可以应用于蛋白质组学研究中.
关键词:
原子转移自由基聚合反应
,
鳞片状聚合物修饰硅胶
,
制备
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胰蛋白酶固定
,
蛋白质组学
