刘璠娜
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饶华新
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张子勇
材料导报
评价N,N,N-三甲基壳聚糖盐酸盐(TMC)及其纳米粒子对质粒DNA(pDNA)的负载及保护能力,考察了其纳米复合物对人类肝癌细胞株(HepG 2细胞)的转染能力.通过复凝聚法制备TMC/pDNA纳米粒子,并采用透射电镜及原子力显微镜表征粒子形态和粒径；采用凝胶阻滞分析观察其对pDNA的保护情况；采用四噻氮唑盐(MTT)比色法测定细胞毒性；以Lipofectamine 2000转染试剂作为阳性对照,检测其对HepG 2细胞的转染活性；采用荧光倒置显微镜观察转染情况.结果表明负载pDNA的TMC纳米粒子多呈球形,粒径为100～300 nm,能有效地包裹和保护基因不被DNaseⅠ酶消化；当TMC与pDNA的质量比为10∶1时,在48 h达到最高的转染效率.
关键词:
季铵盐壳聚糖
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基因载体
,
转染
刘璠娜
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饶华新
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张子勇
功能材料
将异硫氰酸荧光素(FITC)接枝到N,N,N-三甲基壳聚糖盐酸盐(TMC)的侧基上,制备了荧光标记的壳聚糖衍生物TMC-g-FITC.其水溶液与羧甲基壳聚糖(CMC)水溶液经凝聚复合,制备了TMC-g-FITC/CMC纳米粒子荧光探针.用激光散射仪和透射电镜表征了该纳米荧光探针的粒径、粒径分布、Zeta电位值和形态结构.结果表明,纳米粒子的粒径在150～360nm范围,粒径分布约为0.10,Zeta电荷值为正值.用MTT法检测了其细胞毒性,发现纳米粒子对细胞的抑制作用较弱,在实验浓度下细胞的抑制率均低于7%.通过激光共聚焦显微镜研究了TMC-g-FITC/CMC纳米粒子荧光探针对HepG2细胞的渗透和迁移过程:纳米粒子先是在细胞周围富集,然后逐渐渗入细胞的内部,最后直至进入细胞核.
关键词:
N,N,N-三甲基壳聚糖盐酸盐
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羧甲基壳聚糖
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异硫氰酸荧光素
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纳米粒子
,
荧光探针
