王彦
,
高明霞
,
谷雪
,
张祥民
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.01.009
搭建了一个纳升级的二维液相色谱分离平台(nano-2D-LC),该平台可以自动完成进样、除盐、分离及鉴定.以离子交换色谱(SCX)为第一维,反相液相色谱(RPLC)为第二维,对鼠肝组织的蛋白质组进行了研究.SCX采用阶梯式洗脱,RPLC运用线性梯度洗脱,以200 nL/min的速度进行分离,峰容量可达620.
关键词:
蛋白质组
,
多维液相色谱
,
鼠肝
,
纳升级
高明霞
,
关霞
,
洪广峰
,
张祥民
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.05.005
蛋白质组学出现之后,多维高效液相色谱(multidimensional HPLC,MD-HPLC)系统以其快速、高效、自动化程度高以及容易与质谱等其他技术联用等优势而成为蛋白质组学相关分析技术中研究应用的热点.本文主要以本实验室在蛋白质组学研究中的技术进展为主线,介绍了多维高效液相色谱技术的发展,包括经典的"bottom-up"技术和"top-down"式的多维高效液相色谱技术路线,以及为了提高系统的分离通量而自行设计搭建的阵列式多维高效液相色谱平台,这些技术路线在蛋白质组学研究中有着极大的潜在应用价值.
关键词:
多维液相色谱
,
bottom-up
,
top-down
,
阵列式
,
完整蛋白质
,
蛋白质分离
洪广峰
,
高明霞
,
晏国全
,
关霞
,
陶芊
,
张祥民
色谱
为了构建高效的离子交换/反相二维液相色谱(IEC/RPLC)分离平台系统,提高复杂蛋白质样品的分离效率,对色谱柱进行了评价与筛选.通过对实际人肝蛋白质样品的分离效果的比较,选择确定了TSKgel DEAE-5PW弱阴离子交换色谱柱(WAX)作为第一维色谱分离柱;考察了同一规格的10支代表性反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm,30 nm,C4、C8或C18),通过评价其对尿嘧啶、硝基苯、萘和芴的分离性能以及对3种标准蛋白质样品的非特异性吸附、对人肝蛋白质样品的WAX馏分的分离效果,最终确定以Jupiter 300 C4反相色谱柱作为第二维色谱分离柱.对两维色谱柱的选择优化为蛋白质高效分离二维液相色谱平台的搭建提供了可靠基础.
关键词:
蛋白质组学
,
多维液相色谱
,
蛋白质
,
Top-down技术
朱绍春
,
张学洋
,
高明霞
,
晏国全
,
张祥民
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00837
血浆中高丰度蛋白质的存在严重干扰低丰度蛋白质的检测,是困扰血浆蛋白质组学研究的技术瓶颈之一.针对这一热点问题,建立了一种二维液相色谱(强阴离子交换色谱-反相高效液相色谱)分离系统,对血浆中的高丰度蛋白质进行了色谱定位并进行去除.选择TSKgel SuperQ-5PW为第一维色谱分离柱,第二维色谱分离采用Jupiter C4柱,对第一维的馏分进行进一步的分离.通过梯度优化,血浆样品经过二维系统得到充分分离.第二维分离过程中从紫外信号强度高(215 nm,大于20 mAU)的峰中选择10个峰,利用液相色谱-串联质谱鉴定出32种高丰度蛋白质,包括人血清白蛋白、免疫球蛋白G等高丰度蛋白质.该体系为血浆中更多高丰度蛋白质的去除以及血浆蛋白质组学的更深入研究提供了重要思路.
关键词:
蛋白质组学
,
二维液相色谱
,
高丰度蛋白质
,
血浆
张鹏
,
孙长龙
,
张人
,
高明霞
,
张祥民
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.01022
开发了一种新颖便捷的循环肿瘤细胞(CTC)捕获芯片用于癌细胞的分离和检测.CTC芯片以硝酸纤维素膜为基底制备,利用其对蛋白质的超强吸附能力来结合抗体,简便高效,便于将来大规模的推广应用.以非小肺癌细胞NCI-H1650为目标靶细胞,证明了CTC芯片对癌细胞具有很高的捕获效能.向l mL正常人血液中加入500个癌细胞模拟病人血样的分析中成功检测到了182个癌细胞,预示了CTC芯片将来在临床应用上的巨大潜力.
关键词:
硝酸纤维素膜
,
芯片
,
循环肿瘤细胞
,
抗体
冯小燕
,
张津
,
吕美玲
,
高明霞
,
张祥民
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.01003
采用液相色谱-质谱串联的多反应监测技术检测食物中的牛奶过敏原成分——α-酪蛋白,检出限达到了0.5mg/L,与目前已报道的检出限水平相当.该过敏原成分在0.5～ 250 mg/L范围内线性关系良好,说明本方法对于食品中牛奶过敏原成分的检测具有极好的实际应用价值.
关键词:
多反应监测
,
液相色谱-质谱
,
牛奶过敏原
,
α-酪蛋白
,
食品
陈静
,
刘召金
,
戴振宇
,
安保超
,
许群
,
张祥民
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.01051
建立了一个简单、快速、有效的适用于质谱或液相色谱-质谱联用的在线固相萃取(SPE)高通量除盐方法.方法分为单柱和双柱模式,借助于包含双梯度泵(上样泵/分析泵)、自动进样器和配有十通切换阀的柱温箱的高效液相色谱系统,完成样品的自动化在线除盐.单柱模式通过上样泵实现在SPE柱上进样和除盐,被分析物则保留在SPE柱上；除盐完成后,通过阀切换利用分析泵洗脱富集在SPE柱上的被分析物.双柱模式则在单柱模式基础上增加了1根SPE柱,在色谱管理软件控制下2根SPE柱轮流工作,高效率完成样品的在线除盐.该方法在结合质谱分析蛋白质、多肽等领域具有较好的应用前景.
关键词:
固相萃取
,
除盐
,
双梯度高效液相色谱系统
,
阀切换
,
在线
顾一丹
,
李继文
,
宋卫林
,
张祥民
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.09038
采用离子色谱建立了合成气制烯烃(SGTO)水相产物和油相产物中C1～C6有机酸的测定方法.对分离条件进行了优化,使用标准样品测定了线性范围和工作曲线,考察了方法的精密度和准确度,确定了SGTO油相产物样品的碱洗条件,并对SGTO水相产物和油相产物样品进行了测定.结果表明:C1～C6有机酸的质量浓度在各自配制的质量浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.99.标准溶液的回收率测定表明回收率在95.6％～104.3％之间,5次重复测定的相对标准偏差(RSD)在0.4％～3.6％之间,表明该方法具有良好的准确性和精密度.SGTO油相产物中的加标回收率在91.1％～ 96.8％之间,5次重复测定的RSD为0.7％～2.3％,准确性可以满足实际分析的需要.实际SGTO水相产物和油相产物中C1～C6有机酸的分析结果表明,SGTO水相产物中C2～C4有机酸含量较高,而SGTO油相产物中C4～C6有机酸含量较高.本研究对SGTO反应研究、催化剂制备、工艺优化以及设备材料的选择具有重要意义.
关键词:
离子色谱
,
C1 ～C6有机酸
,
合成气制烯烃
,
水相产物
,
油相产物
黄志
,
洪广峰
,
高明霞
,
张祥民
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.10020
构建了一种在线阵列式二维常规柱液相色谱系统，并将其应用于分离血浆中的完整蛋白质。该系统以1根强阴离子交换柱作为第一维分离柱，8根阵列式反相色谱柱作为第二维分离柱。强阴离子交换柱分离的馏分通过十通阀被依次转移到第二维预柱上并得到保留富集，随后第二维流动相通过分流器同时将预柱上的蛋白质反冲至分析柱上进行分离。二维之间以及第二维阵列色谱柱之间均相互独立，从而可以提高系统分离的通量和总峰容量。采用该系统对血浆中的蛋白质进行了完整蛋白质水平上的分离。该系统具有高通量和高分辨率的特点，为血浆样品中高丰度蛋白质的去除以及血浆样品的深入研究提供了一种有效的手段。
关键词:
阵列二维色谱
,
在线
,
蛋白质
,
血浆
,
蛋白质组学
