卢庄
,
王京兰
,
贾伟
,
杨兵
,
蔡耘
,
邓玉林
,
张玉奎
,
钱小红
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.01.003
蛋白质的糖基化是最重要的翻译后修饰之一,与蛋白质结构和功能的关系密切.凝集素亲和色谱是蛋白质糖基化研究中很常用的工具,不同的凝集素可以对不同的单糖或寡糖有特异的富集作用.麦胚凝集素(WGA)由于其特异作用的糖型广泛存在而成为使用最多的凝集素之一.在本研究中,发现将WGA用于糖肽亲和富集会导致部分肽段的降解,从而导致后续的肽段序列分析的失败.本文用4种标准蛋白质对这种现象进行了验证,结果表明肽段的降解可以发生在多个位点,其中较多地发生在酪氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸的羧基端.这一结果提示:在糖蛋白质组研究中,如果应用WGA富集糖肽并采用质谱进行鉴定,则采用半酶切或非特异性酶切的检索策略更为合适.
关键词:
麦胚凝集素亲和色谱
,
糖肽
,
肽键
,
断裂
,
蛋白质组学
徐瑾
,
张凌怡
,
张庆合
,
李彤
,
王风云
,
张维冰
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2003.04.014
采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生糖类物质,通过简化衍生方法,优化分析条件,采用胶束电动毛细管色谱(MEKC)和高效液相色谱(HPLC)两种方法对5种还原单糖的PMP衍生物实现了良好的分离.5种还原单糖衍生物的保留时间的重现性较好(MEKC法的相对标准偏差(RSD)小于5%(n=5),HPLC法的RSD为0.23%(n=5)).用所建立的两种方法对实际样品中的糖进行了分析,结果表明所建方法可作为实际样品中单糖分析的常规方法.
关键词:
胶束电动毛细管色谱
,
高效液相色谱
,
衍生化
,
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮
,
单糖
严丽娟
,
张庆合
,
李彤
,
张维冰
,
冯钰锜
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.05.013
采用溶胶-凝胶法,以四乙氧基硅烷和苯基三乙氧基硅烷作为反应单体,通过酸碱两步催化在毛细管中进行原位缩聚反应,制备了新型有机-无机杂化硅胶基质毛细管整体柱,制备过程简单.整体柱基质中均匀分布的苯基基团可直接用于反相毛细管电色谱的分离,因而不需要对基质再进行衍生化.优化了整体柱的制备条件,采用扫描电镜和压汞法对整体柱的微观结构和孔径分布进行了表征.分别考察了溶胶-凝胶初始反应液中水的用量对柱床结构的影响和两种单体的配比对材料孔径分布的影响.研究了稠环芳烃类化合物在整体柱上的保留行为,用所制备的整体柱分离了7种苯酚类化合物,平均柱效达100 000塔板/m.
关键词:
整体柱
,
毛细管电色谱
,
溶胶-凝胶法
,
有机-无机杂化材料
韩彬
,
王平利
,
张丽华
,
屈锋
,
梁振
,
邓玉林
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.04.001
芯片自由流电泳对于来源稀少的重要生物样品的连续预分级和微制备具有重要的意义.本文在自由流芯片的微分离腔内,通过原位光引发聚合反应制备了聚丙烯酰胺整体材料,并进行了pH梯度的固定化,从而构建了基于固定化pH梯度整体(M-IPG)材料的芯片自由流等电聚焦模式(μFF-IEF).利用该新型分离模式,实现了异硫氰酸荧光素(FITC)标记的最小等电点相差0.33的甘氨酸、脯氨酸和赖氨酸混合物的分离,且分离结果优于传统的μFF-IEF.实验结果表明,通过发展基于M-IPG材料的μFF-IEF模式,不仅可以避免在缓冲溶液中添加两性电解质对后续采用其他模式分离和质谱鉴定的干扰,而且可以获得较高的分离和富集能力,有望在微量样品的连续分离和制备方面发挥重要作用.
关键词:
芯片自由流电泳
,
等电聚焦
,
固定化pH梯度
,
整体材料
,
氨基酸
梁玉
,
吴慈
,
戴忠鹏
,
梁作成
,
梁振
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00469
微流控芯片高效液相色谱-串联质谱系统具有高通量、高灵敏度等优点,已成为生物样品分析的热点领域之一.本文在玻璃芯片上以甲基丙烯酸十二酯(LMA)和三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TMPTMA)为单体,制备了以聚丙烯酸酯整体材料为固定相的捕集柱和分离柱.通过在芯片通道末端连接细内径的毛细管作为芯片-质谱接口,并以常规的液相色谱泵和微阀控制流体,构建了芯片反相液相色谱-电喷雾串联质谱(RPLC-ESI-MS/MS)平台,并将其用于分析牛血清白蛋白(BSA)的酶解产物.经过3次平行分析,BSA的序列覆盖率分别为39.37％、37.89％和34.10％(相对标准偏差为7.3％).采用不同批次制作的芯片构建RPLC-ESI-MS/MS平台,对BSA酶解产物进行分析,其序列覆盖率相当.上述结果表明,该平台具有灵敏度高和重现性好等优点,有望用于蛋白质样品的快速分离和高灵敏度鉴定.
关键词:
微流控芯片
,
反相液相色谱
,
串联质谱
,
整体材料
,
蛋白质分析
李潇
,
曲焱焱
,
张丕乔
,
张津
,
张丽华
,
黄大亮
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00673
以渤海湾具有重要商业价值的9种海龟(小黄鱼、花鲈、蓝点马鲛、鲐、钝吻黄盖鲽、棘头梅童鱼、许氏平鲉、高眼鲽和长蛇鲻)为研究对象,利用聚合酶链式反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)和芯片生物分析技术对其进行鱼种鉴定.首先提取其基因组脱氧核糖核酸(DNA),对其细胞色素b的特定片段(464 bp)进行扩增,然后选择Dde Ⅰ、Hae Ⅲ和Nla Ⅲ3种限制性内切酶进行酶切,并利用芯片生物分析技术得到酶切产物的特异图谱和确切的片段大小,从而有效区分了9种海鱼.研究结果表明,PCR-RFLP和芯片生物分析技术在鱼种鉴定上具有精确、鉴别和快速三大优势,可为鱼类食品检测提供科学依据.
关键词:
聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性
,
芯片实验室
,
物种鉴定
,
细胞色素b
,
鱼类
李沁然
,
杨开广
,
李森武
,
刘键熙
,
张丽华
,
梁振
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.06029
应用可逆加成-断裂链转移（ RAFT）策略制备了一种抗原决定基表面印迹微球。这一工作以转铁蛋白的抗原决定基 N端九肽作为模板，通过共价键合的方式固载于修饰了戊二醛的硅胶颗粒表面。然后以甲基丙烯酸、甲基丙烯酰羟乙酯为功能单体，甲叉基双丙烯酰胺为交联剂，偶氮二异丁腈（ AIBN）为引发剂，N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，在三硫酯试剂2-（十二烷基三硫代碳酸酯基）-2-甲基丙酸的调控下，于70℃进行活性-可控的聚合反应，制备得到分子印迹微球。该材料对模板抗原决定基的识别容量为2.36 mg/g，印迹因子为1.89；对转铁蛋白的识别容量为4.98 mg/g，印迹因子为1.61，120 min内可达到吸附平衡；在多蛋白质竞争识别中，该材料对转铁蛋白识别的印迹因子远高于细胞色素C、乳球蛋白等其他竞争蛋白质的印迹因子。以上结果证明，通过RAFT策略制备得到的抗原决定基分子印迹材料在对抗原决定基具有良好的识别能力的同时，对模板抗原决定基对应的转铁蛋白也具有优良的选择性、较高的识别容量和较快的识别速度。
关键词:
可逆加成-断裂链转移(RAFT)
,
抗原决定基
,
分子印迹
,
蛋白质
邓楠
,
梁振
,
边阳阳
,
张明建
,
张柯
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.10012
基于随机寡核苷酸与蛋白质之间的离子、亲和、疏水、氢键等相互作用力及多种空间结构作用,发展了一种基于随机寡核苷酸文库作为配基的新型血浆样品处理方法.采用寡核苷酸文库修饰的磁性颗粒(MNP@ssDNA)材料,在生理缓冲体系条件下捕获血浆样品中的蛋白质.比较了两种洗脱体系的洗脱效果,并利用nano-RPLC-ESI-MS/MS对获得的蛋白质酶解液组分进行分析.结果表明,MNP@ssDNA材料处理后的血浆蛋白质鉴定数量提升了约29.5%,两种洗脱体系呈现良好的互补性(26.7%).血浆中前10种高丰度蛋白质的谱图占有率从处理前的31.82%降低到21.31%(洗脱体系1)和26.20%(洗脱体系2).在鉴定到的蛋白质中,丰度最低的蛋白质在血浆中的质量浓度约为0.29 ng/mL,该蛋白质仅在MNP@ssDNA材料处理后被鉴定到.结果证明MNP@ssDNA策略不仅能有效降低血浆中高丰度蛋白质的丰度,也为低丰度蛋白质的深度挖掘提供了新的思路.
关键词:
随机寡核苷酸文库
,
血浆
,
蛋白质
,
高丰度
,
低丰度
,
谱图数量
