建立了一种用CM Sepharose CL-6B阳离子交换、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换和Sephadex G-75凝胶排阻三步柱色谱从江浙蝮蛇蛇毒中分离纯化类凝血酶的方法.在实验室小柱分离方案的基础上,对该纯化工艺进行了放大.当上样量达实验室小柱的25倍时,所得类凝血酶的质量指标与实验室小柱基本一致.采用该法所得的蝮蛇类凝血酶经Shim-pack Diol-300高效凝胶排阻柱测得其相对分子质量约为33 500,用Shim-pack VP-ODS反相色谱柱检测其纯度约为96% .从江浙粗蛇毒中提取类凝血酶时,类凝血酶的总质量收率约为0.3% ,总活性收率约为64% ,比活可达2 000 U/mg.
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